Вирустық ДНҚ және РНҚ оқшаулау жинағы Вирустық ДНҚ және РНҚ экстракциясын тазартуға арналған дайындық жинақтары
Техникалық сипаттамалар
50 дайындық, 200 дайындық
Вирустық РНҚ нуклеин қышқылын тазарту экстракциясын оқшаулау жинағы плазма, сарысу, жасушасыз дене сұйықтығы және жасуша культурасының үстіңгі қабаты сияқты үлгілерден жоғары таза және жоғары сапалы вирустық РНҚ-ны тиімді шығарып алатын Foregene әзірлеген айналдыру бағанасы мен формуласын пайдаланады.Жинақ үлгілерден РНҚ-ның аз мөлшерін оңай түсіре алатын сызықтық акриламидті арнайы қосады.Тек РНҚ-бағаны РНҚ-ны тиімді байланыстыра алады.Жинақ бір уақытта көптеген үлгілерді өңдей алады.
Бүкіл жинақта RNase жоқ, сондықтан тазартылған РНҚ бұзылмайды.viRW1 буфері және viRW2 буфері алынған вирустық нуклеин қышқылында ақуыздың, нуклеазаның немесе басқа қоспалардың болмауын қамтамасыз ете алады, оларды тікелей төменгі ағындағы молекулалық биология эксперименттері үшін пайдалануға болады.
Жинақтың құрамдас бөліктері
| Сызықтық акриламид |
| DRL буфері |
| RW1 буфері, RW2 буфері |
| RNase жоқ ddH2O |
| ДНҚ/РНҚ бағанасы |
| Нұсқаулар |
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■ Бүкіл процесс бойы бөлме температурасында (15-25℃) жұмыс, мұзды ваннасыз және төмен температурада центрифугасыз.
■ RNase-Free толық жиынтығы, РНҚ деградациясына алаңдаудың қажеті жоқ.
■ Нуклеин қышқылының жоғары шығымдылығы: тек ДНҚ/РНҚ бар баған және бірегей формула ДНҚ мен РНҚ-ны тиімді тазарта алады.
■ Үлгіні өңдеудің үлкен сыйымдылығы: әр жолы 200 мкл үлгіге дейін өңдеуге болады.
■ Жылдам жылдамдық: пайдалану оңай және оны 20 минут ішінде аяқтауға болады.
■ Қауіпсіздік: органикалық реагент қажет емес.
■ Жоғары сапа: Тазартылған РНҚ фрагменттері жоғары тазалықта, ақуыз және басқа қоспалардан таза және әр түрлі тәжірибелік қолданбаларға жауап бере алады.
Жинақ қолданбасы
Ол плазма, сарысу, жасушасыз дене сұйықтығы және жасуша культурасының супернатанты сияқты үлгілердегі вирустық нуклеин қышқылын алу және тазарту үшін жарамды.
Жұмыс барысы
Диаграмма
Сақтау және сақтау мерзімі
■ Бұл жинақты құрғақ жағдайда бөлме температурасында (15-25℃) 24 ай бойы сақтауға болады;ұзақ уақыт сақтау қажет болса, оны 2–8℃ температурада сақтауға болады.
■ Сызықтық акриламид ерітіндісін бөлме температурасында 7 күн бойы сақтауға болады;жинақты алғаннан кейін оны шығарып, -20°C температурада сақтаңыз.
■ Buffer DRL-ге сызықтық акриламидті қосқаннан кейін оны 2-8°C температурада 48 сағатқа дейін сақтауға болады.Дайын ерітіндіні қолданыңыз.
Мәселені талдау нұсқаулығы
Төменде вирустық ДНҚ/РНҚ экстракциясы кезінде туындауы мүмкін мәселелердің талдауы берілген, бұл сіздің эксперименттеріңізге пайдалы болады деп үміттенеді.Оған қоса, пайдалану нұсқаулары мен мәселені талдаудан басқа эксперименттік немесе техникалық мәселелер бойынша біз сізге көмектесу үшін арнайы техникалық қолдау көрсетеміз.Қандай да бір қажеттіліктеріңіз болса, бізге хабарласыңыз: 028-83360257 немесе E-mail:
Tech@foregene.com.
Нуклеин қышқылының экстракциясы жоқ немесе нуклеин қышқылының төмен шығуы
Әдетте қалпына келтіру тиімділігіне әсер ететін көптеген факторлар бар, мысалы: үлгідегі нуклеин қышқылының құрамы, жұмыс әдісі, элюция көлемі және т.б.
Жалпы себептерді талдау:
1. Процедура барысында мұз ваннасы немесе төмен температурада (4°C) центрифугалау орындалды.
Ұсыныс: бүкіл процесс бойы бөлме температурасында (15-25°C) жұмыс істеңіз, мұзды ваннаға және төмен температурада центрифугалауға болмайды.
2. Үлгі дұрыс сақталмаған немесе үлгі тым ұзақ сақталған.
Ұсыныс: Үлгілерді -80°C температурада сақтаңыз және қайталанатын мұздату мен ерітуге жол бермеңіз;нуклеин қышқылын алу үшін жаңадан жиналған үлгілерді қолдануға тырысыңыз.
3. Үлгі лизисі жеткіліксіз.
Ұсыныс: Үлгі мен лизистің жұмыс ерітіндісі мұқият араласып, бөлме температурасында (15-25°C) 10 минут бойы инкубацияланғанына көз жеткізіңіз.
4. Элюентті дұрыс қоспау.
Ұсыныс: RNase-Free ddH2O тазарту бағанының мембранасының ортасына тамшылатып қосылғанына көз жеткізіңіз және оны тазарту бағанының сақинасына түсірмеңіз.
5. RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемі қосылмаған.
Ұсыныс: Нұсқауларды орындаңыз, RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосыңыз және жинақты қолданар алдында жақсылап араластырыңыз.
6. Сәйкес емес үлгі көлемі.
Ұсыныс: Әрбір 500 мкл буфер DRL үшін 200 мкл үлгі өңделеді.Үлгіні шамадан тыс өңдеу нуклеин қышқылының экстракция шығымының төмендеуіне әкеледі.
7. Сәйкес емес элюция көлемі немесе толық емес элюция.
Ұсыныс: тазарту колоннасының элюент көлемі 30-50 мкл;егер элюция әсері қанағаттанарлық болмаса, алдын ала қыздырылған RNase-Free ddH2O қосқаннан кейін бөлме температурасында уақытты ұзарту ұсынылады, мысалы 5-10 мин.
8. RW2 буферімен жуудан кейін этанол колонкада қалады.
Ұсыныс: RW2 буферімен центрифугалаудан кейін 2 минут бойы этанол қалса, қалдық этанолды толығымен жою үшін бағанды центрифугалаудан кейін 5 минут бойы бөлме температурасында орналастыруға болады.
Тазартылған нуклеин қышқылы бұзылады
Тазартылған нуклеин қышқылының сапасы үлгінің сақталуына, RNase ластануына, жұмысына және басқа факторларға байланысты.Жалпы себептерді талдау:
1. Жиналған үлгілер уақытында сақталмаған.
Ұсыныс: Егер үлгі жиналғаннан кейін уақытында пайдаланылмаса, оны дереу төмен температурада -80°C температурада сақтаңыз.РНҚ экстракциясы үшін жаңадан жиналған үлгілерді пайдаланып көріңіз.
2. Үлгілерді жинап, қайта-қайта мұздатыңыз және ерітіңіз.
Ұсыныс: Үлгілерді жинау және сақтау кезінде мұздату мен ерітуден (бір реттен көп емес) аулақ болыңыз, әйтпесе нуклеин қышқылының шығуы төмендейді.
3. Операция бөлмесінде RNase енгізіледі немесе бір рет қолданылатын қолғаптар, маскалар және т.б. киілмейді.
Ұсыныс: РНҚ-ны экстракциялау эксперименттерін РНҚ-ның бөлек операциялық бөлмесінде жасаған дұрыс, эксперимент алдында зертханалық үстелді тазалау керек.
Тәжірибе кезінде РНҚ-ның ыдырауын болдырмау үшін бір рет қолданылатын қолғаптар мен маскалар киіңіз.
4. Қолдану кезінде реагент RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: Қатысты эксперименттер үшін жаңа вирустық ДНҚ/РНҚ оқшаулау жинағымен ауыстырыңыз.
5. РНҚ манипуляциясы үшін пайдаланылатын центрифуга түтіктері мен тамшуыр ұштары RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: РНҚ экстракциясы үшін пайдаланылатын центрифуга түтіктерінің, тамшуыр ұштарының, тамшуырлардың және т.б. барлығында RNase жоқ екеніне көз жеткізіңіз.
Тазартылған нуклеин қышқылы төменгі тәжірибелерге әсер етеді
Тазарту колонкасы арқылы тазартылған ДНҚ және РНҚ, егер тұз ионы мен ақуыз мөлшері тым жоғары болса, ол төменгі ағындағы тәжірибелерге әсер етеді, мысалы: ПТР күшейту, кері транскрипция және т.б.
1. Элюцияланған ДНҚ мен РНҚ-да қалдық тұз иондары болады.
Ұсыныс: RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемі қосылғанына көз жеткізіңіз және тазарту бағанасын пайдалану нұсқаулығында көрсетілген центрифугалау жылдамдығымен екі рет жуыңыз;Тұз ионының ластануын азайту үшін центрифугалауды орындаңыз.
2. Элюцияланған ДНҚ мен РНҚ-да этанол қалдықтары бар.
Ұсыныс: RW2 буферімен жууды растағаннан кейін, пайдалану нұсқауларындағы центрифугалау жылдамдығымен бос түтікті центрифугалауды орындаңыз;әлі де этанол қалдығы болса, бос түтікті центрифугалауға болады, содан кейін этанол қалдығын барынша жою үшін оны бөлме температурасында 5 минутқа қоюға болады.
Нұсқаулықтар:
Вирустық ДНҚ және РНҚ оқшаулау жинағы Нұсқаулық
