Жасушаның жалпы РНҚ оқшаулау жинағы Жасушадан жалпы РНҚ изоляциясын тазарту жинақтары
Жинақ сипаттамасы:
Әртүрлі өсірілген жасушалардан 11 минут ішінде жоғары тазартылған және сапалы жалпы РНҚ алуға болады.
RNase жоқ
Бөлме температурасында жұмыс істейді (15-25 ℃)
ДНҚ-тазалау бағанымен
РНҚ жоғары шығымдылығы
Жылдам: 11 минутта экстракцияны аяқтаңыз
Қауіпсіздік: Органикалық химиялық заттар жоқ
Сипаттама
Бұл жинақ 96, 24, 12 және 6 шұңқырлы пластиналарда өсірілген жасушалардан жоғары таза және жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны тиімді бөліп алуға болатын Foregene әзірлеген айналдыру бағанасы мен формуласын пайдаланады.
Жинақ супернатантты және жасуша лизатын оңай бөліп, геномдық ДНҚ-ны байланыстыратын және алып тастай алатын тиімді ДНҚ-тазалау бағанымен қамтамасыз етеді.Операция қарапайым және уақытты үнемдейді.
Tол тек РНҚ бар баған РНҚ-ны бірегей формуламен тиімді байланыстыра алады.Үлгілердің үлкен санын бір уақытта өңдеуге болады.
Жинақтың құрамдас бөліктері
| Жинақ құрамы | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Буфер cRL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер cRL2 | 15 мл | 60 мл |
| RW1 буфері* | 25 мл | 100 мл |
| RW2 буфері | 24 мл | 96 мл |
| RNase жоқ ddH2O | 10 мл | 40 мл |
| Тек РНҚ-баған | 50 | 200 |
| ДНҚ-тазалау бағанасы | 50 | 200 |
| Нұсқау | 1 | 1 |
*Операция кезінде қолғап киіңіз және қорғаныс шараларын қолданыңыз, өйткені буфер cRL1 және RW1 буферінде тітіркендіргіш хаотропты тұздар бар.
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■ Бүкіл процесс бөлме температурасында (15-25℃), мұз ваннасынсыз және төмен температурада центрифугасыз жұмыс істейді.
■ Бүкіл жинақта RNase жоқ, РНҚ деградациясына алаңдаудың қажеті жоқ.
■ ДНҚ-тазалау бағанасы ДНҚ-ны арнайы байланыстырады, осылайша жинақ қосымша DNase қоспай-ақ геномдық ДНҚ ластануын жоя алады.
■ Жоғары РНҚ шығымы: тек РНҚ-бағаны және бірегей формула РНҚ-ны тиімді тазарта алады.
■ Жылдам жылдамдық: пайдалану оңай және оны 11 минутта аяқтауға болады.
■ Қауіпсіздік: органикалық реагент қажет емес.
■ Жоғары сапа: Тазартылған РНҚ жоғары тазалықта, ақуыз және басқа қоспалардан таза және әр түрлі кейінгі тәжірибелерге жауап бере алады.
Жинақ қолданбасы
Ол 96, 24, 12 және 6 шұңқырлы пластиналардағы өсірілген жасушалардан жалпы РНҚ-ны алу және тазарту үшін жарамды.
Жұмыс барысы
Диаграмма
Жасушалардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағының агарозды гель батареясының диаграммасы жоғарыда көрсетілген жасушалардың әртүрлі сандарын өңдеді, 20 мкл көлемді элюция, 2 мкл тазартылған жалпы РНҚ 1% алыңыз.
Сақтау және сақтау мерзімі
Жинақты бөлме температурасында (15–25 ℃) 12 ай немесе ұзағырақ (24 ай) 2–8 ℃ температурада сақтауға болады.
CRL1 буферін 2-гидрокси-1-этантиол (міндетті емес) қосқаннан кейін 1 ай бойы 4 ℃ температурада сақтауға болады.
РНҚ алынбайды немесе РНҚ шығымы төмен
Көбінесе қалпына келтіру тиімділігіне әсер ететін әртүрлі факторлар бар, мысалы: тін үлгісінің РНҚ мазмұны, жұмыс әдісі, элюция көлемі және т.б.
1. Жұмыс кезінде мұз ваннасы немесе криогенді (4 °C) центрифугалау орындалды.
Ұсыныс: бүкіл процесс бойы бөлме температурасында (15-25 ° C) жұмыс істеңіз, мұзды ваннаға түсірмеңіз және төмен температурада центрифугалауға болмайды.
2. Үлгіні дұрыс сақтамау немесе үлгіні сақтау уақыты шамадан тыс.
Ұсыныс: Үлгілерді -80 °C температурада сақтаңыз немесе сұйық азотта мұздатыңыз және мұздату-ерітуді қайталап қолданбаңыз;РНҚ экстракциясы үшін жаңа тіндерді немесе өсірілген жасушаларды қолдануға тырысыңыз.
3. Үлгі лизисі жеткіліксіз.
Ұсыныс: Тіндерді гомогенизациялау кезінде тіннің жеткілікті түрде гомогенизацияланғанын және тін жасушаларының РНҚ бөлінуін түсіндіру үшін жеткілікті түрде бөлінгенін қамтамасыз етіңіз.
4. Элюент дұрыс қосылмаған.
Ұсыныс: RNase-Free ddH екенін растаңыз2Тазарту колоннасының мембранасының ортасына О тамшылатып қосылады.
5. RL2 буферіне немесе RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемі қосылмаған.
Ұсыныс: Нұсқауларды орындаңыз, RL2 буферіне және RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосыңыз және жинақты қолданар алдында жақсылап араластырыңыз.
6. Тін үлгісінің дозасы сәйкес емес.
Ұсыныс: 10-20 мг ұлпаны немесе (1-5) × 10 пайдаланыңыз6RL1 буферіне 500 мкл жасушалар, өйткені тіндерді шамадан тыс пайдалану РНҚ экстракциясының төмендеуіне әкелуі мүмкін.
7. Дұрыс емес элюция көлемі немесе толық емес элюция.
Ұсыныс: тазарту колоннасының элюция көлемі 50-200 мкл;егер элюция әсері қанағаттанарлық болмаса, алдын ала қыздырылған RNase-Free ddH қосқаннан кейін бөлме температурасын орналастыру уақытын ұзарту ұсынылады.2O, мысалы, 5-10 мин.
8. RW2 буферін жуудан кейін тазарту бағанасында этанол қалдығы бар.
Ұсыныс: RW2 буферін жуудан кейін этанол қалдығы болса, бос түтікті 1 мин центрифугалау, бос түтік центрифугалау операциясының уақытын 2 минутқа дейін арттыруға болады немесе қалдық этанолды жеткілікті түрде жою үшін тазарту бағанасын бөлме температурасында 5 минутқа қоюға болады.
Тазартылған РНҚ бұзылады
Тазартылған РНҚ сапасы үлгінің сақталуы, RNase ластануы және манипуляция және т.б. сияқты факторларға байланысты.
1. Ұлпа үлгілері уақытында сақталмайды.
Ұсыныс: Егер тін үлгілері немесе жасушалар жиналғаннан кейін дер кезінде пайдаланылмаса, дереу -80 °C температурада немесе сұйық азотта криоконсервациялаңыз.РНҚ алу үшін мүмкіндігінше жаңадан алынған тін немесе жасуша үлгісін пайдаланыңыз.
2. Ұлпа үлгілерін қайталап мұздату-еріту.
Ұсыныс: Тін үлгілерін сақтау кезінде сақтау үшін оларды кішкене бөліктерге кесіп, үлгінің қайта-қайта мұздату-ерітуін және РНҚ деградациясын болдырмау үшін оларды пайдалану кезінде бөліктердің бірін алып тастаған дұрыс.
3. Операция кезінде RNase енгізіледі немесе бір рет қолданылатын қолғап, маска және т.б. кимейді.
Ұсыныс: РНҚ экстракциялау эксперименттерін РНҚ манипуляциясының бөлек бөлмелерінде орындаған дұрыс және тәжірибе алдында кесте тазартылады.
Тәжірибе кезінде RNAse енгізуден туындаған РНҚ деградациясын азайту үшін бір рет қолданылатын қолғаптар мен маскалар киіңіз.
4. Қолдану кезінде реагенттер RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: Қатысты эксперименттер үшін жаңа Animal Total RNA оқшаулау жинағымен ауыстырыңыз.
5. РНҚ манипуляциясында қолданылатын центрифуга түтіктері, ұштары және т.б. RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: РНҚ экстракциясында қолданылатын центрифуга түтіктерінің, ұштарының, тамшуырларының және т.б. барлығында RNase жоқ екенін растаңыз.
Тазартылған алынған РНҚ төменгі ағындағы эксперименттерге әсер етеді
Тазарту бағанымен тазартылған РНҚ, егер тұз иондары, ақуыз мөлшері тым үлкен болса, төменгі ағындық тәжірибеге әсер етеді, мысалы: кері транскрипция, Northern Blot et al.
1. Элюцияланған РНҚ-да тұз ионының қалдықтары болады.
Ұсыныс: RW2 буферіне этанолдың дұрыс көлемі қосылғанын растаңыз және жұмыс үшін көрсетілген центрифугалық жылдамдықпен 2 тазарту бағанасын жууды орындаңыз;егер тұз ионының қалдығы болса, тазарту бағанасын RW2 буферіне бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз және тұздың ластануын барынша жою үшін центрифугалауды орындаңыз.
2. Элюцияланған РНҚ-дағы этанол қалдығы.
Ұсыныс: RW2 буферін жуғаннан кейін бос түтікті центрифугалау операциясын жұмыс үшін көрсетілген центрифугалау жылдамдығында орындаңыз, егер этанол қалдығы әлі болса, бос түтік центрифугалау операциясының уақытын 2 минутқа дейін арттырыңыз немесе бөлме температурасында 5 м қалдырыңыз.
