Жануарлардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы Жануарлардың тіндері мен жасушасына арналған жалпы РНҚ экстракциясы және тазарту жинағы
Жинақ сипаттамасы:
Жануарлардың әртүрлі ұлпаларынан жоғары таза және жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны тез және тиімді түрде алыңыз.
РНҚ деградациясына алаңдаудың қажеті жоқ.Бүкіл жүйе RNase-сіз
ДНҚ-тазалау бағанының көмегімен ДНҚ-ны тиімді жою
DNase қоспай ДНҚ-ны алып тастаңыз
Қарапайым—барлық операциялар бөлме температурасында орындалады
Жылдам — операцияны 30 минутта аяқтауға болады
Қауіпсіз – органикалық реагент пайдаланылмайды
Жоғары тазалық — OD260/280≈1,8-2,1
Жинақтардың сипаттамасы
50 дайындық, 200 дайындық
Бұл жинақ пайдаланадыайналдыру бағаны және формулабіздің компания әзірлеген, ол жоғары тиімділікпен әртүрлі жануарлар тіндерінен жоғары таза және жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны бөліп алады. Бұл тиімді ДНҚ-тазалау бағанасын қамтамасыз етеді, ол геномдық ДНҚ-ны супернатантты және тін лизатынан оңай бөліп, адсорбциялайды, қарапайым және уақытты үнемдейді;Тек РНҚ-баған РНҚ-ны тиімді байланыстыра алады және бірегей формуламен бір уақытта өңделуі мүмкін Көптеген үлгілер.
Бүкіл жүйе RNase-сіз, сондықтан алынған РНҚ бұзылмайды;RW1 буфері, RW2 буфері буферді жуу жүйесі, алынған РНҚ-да ақуыз, ДНҚ, ион және органикалық қосылыстардың ластануы болмайды.
Жинақтың құрамдас бөліктері
| Жануарлардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы | ||
| Жинақтың құрамдас бөліктері | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 Т | 200 Т | |
| RL1 буфері* | 25 мл | 100 мл |
| RL2 буфері | 15 мл | 60 мл |
| RW1 буфері* | 25 мл | 100 мл |
| RW2 буфері | 24 мл | 96 мл |
| RNase жоқ ddH2O | 10 мл | 40 мл |
| Тек РНҚ-баған | 50 | 200 |
| ДНҚ-тазалау бағанасы | 50 | 200 |
| Нұсқаулық | 1 дана | 1 дана |
Өнім туралы ақпарат
| Формат | Айналдыру бағанасы | Тазарту компоненті | Форгендік колонна, реагент |
| Ағын | 1-24 үлгілер | Бір дайындық уақыты | ~30 мин (24 үлгі) |
| Центрифуга | Үстелдік центрифуга | Пиролизді бөлу | Центрифугалық бөлу |
| Үлгі | Жануарлардың ұлпасы;ұяшық | Үлгілердің мөлшері | Тін: 10-20 мг;Ұяшық:(1-5)×106 |
| Элюция көлемі | 50-200 мкл | Максималды жүктеу көлемі | 850 мкл |
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■ РНҚ деградациясына алаңдаудың қажеті жоқ;бүкіл жүйе RNase-сіз
■ ДНҚ-ны қолдану арқылы ДНҚ-тазалау бағанын тиімді түрде жойыңыз
■ DNase қоспай ДНҚ-ны алып тастаңыз
■ Қарапайым - барлық операциялар бөлме температурасында орындалады
■ Жылдам жұмысты 30 минутта аяқтауға болады
■ Қауіпсіз – органикалық реагент қажет емес
■ Жоғары тазалық -OD260/280≈1,8-2,1
Жинақ қолданбасы
Ол әртүрлі жаңа піскен немесе мұздатылған жануарлар ұлпаларынан немесе өсірілген жасушалардан жалпы РНҚ-ны алу және тазарту үшін жарамды.
Өнімнің параметрлері
■ Төменгі қолданбалар: бірінші тізбекті cDNA синтезі, RT-PCR, молекулалық клондау, Northern Blot және т.б.
■ Үлгілер: жануарлар тіндері, өсірілген жасушалар
■ Дозасы: ұлпалар 10-20 мг, жасушалар(2-5)×106
■ Тазарту бағанының ДНҚ-ны байланыстырудың максималды сыйымдылығы: 80 мкг
■ Элюция көлемі: 50-200 мкл
Диаграмма
Жануарлардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы өңделген 20 мг
Жаңа тышқан үлгілері, 5% тазартылған жалпы РНҚ 1% агарды алыңыз
Гликогель электрофорезі
1: көкбауыр 2: бүйрек
3: Бауыр 4: Жүрек
Сақтау және сақтау мерзімі
Жинақты бөлме температурасында (15–25 ℃) 24 ай немесе ұзағырақ 2–8 ℃ температурада сақтауға болады.RL1 буферін β-меркаптоэтанол (міндетті емес) қосқаннан кейін 1 ай бойы 4 ℃ температурада сақтауға болады.
Келтірілген мақалалар
1.IF: 18.808:Чжэн, Ц., Цинь, Ф., Луо, Р., т.б.Орталық композиттік дизайнды оңтайландыру арқылы бауыр негізін өңдеуге арналған мРНҚ жүктелген липидтәрізді нанобөлшектер.Adv.Функция.Матер.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, т.б.Терапиялық дің жасушаларын дайындаудағы жасушалардың өздігінен апоптозы фосфатидилсериннің бөлінуі арқылы иммуномодуляциялық әсер етеді.Сигнал Трансмиссиясы Ther.2021 ж. 14 шілде;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, т.б.N7-метилгуанозин тРНҚ модификациясы онкогенді мРНҚ трансляциясын күшейтеді және бауырішілік холангиокарциноманың үдеуіне ықпал етеді.Мол жасушасы.2021 29 шілде: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y және т.б.Mettl14-делдалдық m6A модификациясы эндоплазмалық ретикулум гомеостазын сақтау арқылы бауыр регенерациясын жеңілдетеді.Жасушалық мол гастроэнтерол гепатол.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
РНҚ изоляциясының жинақтары басқа үлгі көздеріқол жетімді:
Жасуша, өсімдік, вирус, қан және т.б.
РНҚ алынбайды немесе РНҚ шығымы төмен
Көбінесе қалпына келтіру тиімділігіне әсер ететін әртүрлі факторлар бар, мысалы: тін үлгісінің РНҚ мазмұны, жұмыс әдісі, элюция көлемі және т.б.
1. Жұмыс кезінде мұз ваннасы немесе криогенді (4 °C) центрифугалау орындалды.
Ұсыныс: бүкіл процесс бойы бөлме температурасында (15-25 ° C) жұмыс істеңіз, мұзды ваннаға түсірмеңіз және төмен температурада центрифугалауға болмайды.
2. Үлгіні дұрыс сақтамау немесе үлгіні сақтау уақыты шамадан тыс.
Ұсыныс: Үлгілерді -80 °C температурада сақтаңыз немесе сұйық азотта мұздатыңыз және мұздату-ерітуді қайталап қолданбаңыз;РНҚ экстракциясы үшін жаңа тіндерді немесе өсірілген жасушаларды қолдануға тырысыңыз.
3. Үлгі лизисі жеткіліксіз.
Ұсыныс: Тіндерді гомогенизациялау кезінде тіннің жеткілікті түрде гомогенизацияланғанын және тін жасушаларының РНҚ бөлінуін түсіндіру үшін жеткілікті түрде бөлінгенін қамтамасыз етіңіз.
4. Элюент дұрыс қосылмаған.
Ұсыныс: RNase-Free ddH екенін растаңыз2Тазарту колоннасының мембранасының ортасына О тамшылатып қосылады.
5. RL2 буферіне немесе RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемі қосылмаған.
Ұсыныс: Нұсқауларды орындаңыз, RL2 буферіне және RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосыңыз және жинақты қолданар алдында жақсылап араластырыңыз.
6. Тін үлгісінің дозасы сәйкес емес.
Ұсыныс: 10-20 мг ұлпаны немесе (1-5) × 10 пайдаланыңыз6RL1 буферіне 500 мкл жасушалар, өйткені тіндерді шамадан тыс пайдалану РНҚ экстракциясының төмендеуіне әкелуі мүмкін.
7. Дұрыс емес элюция көлемі немесе толық емес элюция.
Ұсыныс: тазарту колоннасының элюция көлемі 50-200 мкл;егер элюция әсері қанағаттанарлық болмаса, алдын ала қыздырылған RNase-Free ddH қосқаннан кейін бөлме температурасын орналастыру уақытын ұзарту ұсынылады.2O, мысалы, 5-10 мин.
8. RW2 буферін жуудан кейін тазарту бағанасында этанол қалдығы бар.
Ұсыныс: RW2 буферін жуудан кейін этанол қалдығы болса, бос түтікті 1 мин центрифугалау, бос түтік центрифугалау операциясының уақытын 2 минутқа дейін арттыруға болады немесе қалдық этанолды жеткілікті түрде жою үшін тазарту бағанасын бөлме температурасында 5 минутқа қоюға болады.
Тазартылған РНҚ бұзылады
Тазартылған РНҚ сапасы үлгінің сақталуы, RNase ластануы және манипуляция және т.б. сияқты факторларға байланысты.
1. Ұлпа үлгілері уақытында сақталмайды.
Ұсыныс: Егер тін үлгілері немесе жасушалар жиналғаннан кейін дер кезінде пайдаланылмаса, дереу -80 °C температурада немесе сұйық азотта криоконсервациялаңыз.РНҚ алу үшін мүмкіндігінше жаңадан алынған тін немесе жасуша үлгісін пайдаланыңыз.
2. Ұлпа үлгілерін қайталап мұздату-еріту.
Ұсыныс: Тін үлгілерін сақтау кезінде сақтау үшін оларды кішкене бөліктерге кесіп, үлгінің қайта-қайта мұздату-ерітуін және РНҚ деградациясын болдырмау үшін оларды пайдалану кезінде бөліктердің бірін алып тастаған дұрыс.
3. Операция кезінде RNase енгізіледі немесе бір рет қолданылатын қолғап, маска және т.б. кимейді.
Ұсыныс: РНҚ экстракциялау эксперименттерін РНҚ манипуляциясының бөлек бөлмелерінде орындаған дұрыс және тәжірибе алдында кесте тазартылады.
Тәжірибе кезінде RNAse енгізуден туындаған РНҚ деградациясын азайту үшін бір рет қолданылатын қолғаптар мен маскалар киіңіз.
4. Қолдану кезінде реагенттер RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: Қатысты эксперименттер үшін жаңа Animal Total RNA оқшаулау жинағымен ауыстырыңыз.
5. РНҚ манипуляциясында қолданылатын центрифуга түтіктері, ұштары және т.б. RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: РНҚ экстракциясында қолданылатын центрифуга түтіктерінің, ұштарының, тамшуырларының және т.б. барлығында RNase жоқ екенін растаңыз.
Тазартылған алынған РНҚ төменгі ағындағы эксперименттерге әсер етеді
Тазарту бағанымен тазартылған РНҚ, егер тұз иондары, ақуыз мөлшері тым үлкен болса, төменгі ағындық тәжірибеге әсер етеді, мысалы: кері транскрипция, Northern Blot et al.
1. Элюцияланған РНҚ-да тұз ионының қалдықтары болады.
Ұсыныс: RW2 буферіне этанолдың дұрыс көлемі қосылғанын растаңыз және жұмыс үшін көрсетілген центрифугалық жылдамдықпен 2 тазарту бағанасын жууды орындаңыз;егер тұз ионының қалдығы болса, тазарту бағанасын RW2 буферіне бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз және тұздың ластануын барынша жою үшін центрифугалауды орындаңыз.
2. Элюцияланған РНҚ-дағы этанол қалдығы.
Ұсыныс: RW2 буферін жуғаннан кейін бос түтікті центрифугалау операциясын жұмыс үшін көрсетілген центрифугалау жылдамдығымен орындаңыз, егер әлі де этанол қалдығы бар болса, бос түтік центрифугалау операциясының уақытын 2 минутқа дейін арттырыңыз немесе центрифугалаудың бос түтігін қайта ұлғайту үшін оны бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз.
