(96 шұңқыр) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR жинағы – SYBR Green I
Сипаттамалар
The(96 ұңғыма) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR жинағы–SYBR Green Iқамтамасыз етедібірегей лизис буфер жүйесіto РНҚ-ны тез бөледіөсірілген жасушаданRT-qPCR реакцияларына арналған үлгілер, уақытты қажет ететін және көп күш жұмсауды болдырмайдыРНҚ тазарту процесі және қажетті РНҚ үлгісін алу үшін небәрі 7 минут кетеді.The5× Тікелей RT миксжәне2× Тікелей qPCR Mix-SYBRқорапта берілген тез жәненақты уақыттағы сандық мәнді тиімді алуПТР нәтижелері.
5× Direct RT Mix және 2× Direct qPCR Mix-SYBR ингибиторларға күшті төзімділікке ие және тиімді кері транскрипция мен арнайы күшейту үшін үлгі ретінде сыналатын үлгінің лизатын пайдалана алады.Реагент құрамында РНҚ-ға жоғары жақындығы бар Foregene бірегей кері транскриптазасы, сонымен қатар ыстық D-Taq ДНҚ полимеразасы, dNTPs, MgCl бар.2 , реакция буфері, ПТР оңтайландырғышы және тұрақтандырғышы және үлгіні жылдам, оңай және дәл анықтау үшін лизис буферімен бірге пайдалануға болады және ол жоғары сезімталдық, күшті ерекшелік және жақсы тұрақтылық сипаттамаларына ие.
Жинақ 96 шұңқырлы өсірілген жасушалардың микрожүйелік лизисіне бағытталған және жақсы біркелкі және консистенциясы бар;жинақтың құрамдас бөліктері реагенттерді қайта-қайта ашу, мұздату және еріту нәтижесінде пайда болатын ластануды және реагент өнімділігінің нашарлауын болдырмай, бір реттік пайдалануға арналған 96 ұяшық тақтасына сәйкес келетін 96 лизис реакциясын, 96 кері транскрипция реакциясын және 96×2 qPCR реакциясын қамтамасыз етеді.
Жинақтың құрамдас бөліктері
| Жинақ құрамы ( 50 μL лизис жүйесі/20 мклRT реакция жүйесі /20μL qPCR реакция жүйесі) | DRT-03011 | Ескерту | |
| 96Т | |||
| БөлімI | БуферCL | 5 мл | ҰяшықЛизис |
| ШетелдікProtease Plus II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| Бөлім II | ДНҚӨшіргіш | 100 μL | |
| 5× Тікелей RT микс | 400 μL | RT | |
| 2× Тікелей qPCR араластыру-SYBR | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX анықтамалық бояуы | 400мкл | ||
| RNase- ТегінddH2 O | 1,7 мл |
| |
| Mжылдық | 1 дана | 1 порция | |
*: ДНҚ өшіргіш лизис реагенті жинақтың II бөлігіне кіреді;Cell Lysis, RT және qPCR компоненттерін бөлек сатып алуға болады.
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■Қарапайым және тиімді: Cell Direct RT технологиясымен РНҚ үлгілерін небәрі 7 минутта алуға болады.
■ Үлгіге сұраныс аз, 10 ұяшықты сынауға болады.
■ Жоғары өткізу қабілеттілігі: ол 384, 96, 24, 12, 6 шұңқырлы пластиналарда өсірілген жасушалардағы РНҚ-ны жылдам анықтай алады.
■ DNA Eraser босатылған геномдарды жылдам жоя алады, кейінгі эксперимент нәтижелеріне әсерді айтарлықтай азайтады.
■ Оңтайландырылған RT және qPCR жүйесі екі сатылы RT-PCR кері транскрипциясын тиімдірек етеді, ал ПТР нақтырақ және RT-qPCR реакция ингибиторларына төзімдірек етеді.
Жинақ қолданбасы
Қолдану аясы: өсірілген жасушалар.
- Үлгі лизисі арқылы шығарылған РНҚ: тек осы жинақтың RT-qPCR үлгісіне қолданылады.
- Жинақ келесі мақсаттарда пайдаланылуы мүмкін: ген экспрессиясын талдау, siRNA арқылы генді өшіру әсерін тексеру, дәрілік скрининг және т.б.
Сақтау және сақтау мерзімі
Бұл жинақтың I бөлігін 4-те сақтау керек℃;II бөлікті -20℃ температурада сақтау керек.
Foregene Protease Plus II 4 температурада сақталуы керек℃, -20℃ температурада қатып қалмаңыз.
Реагент 2×Тікелей qPCR Mix-Taqman -20 температурада сақталуы керек℃қараңғыда;жиі пайдаланылса, оны 4-те де сақтауға болады℃ қысқа мерзімді сақтау үшін (10 күн ішінде пайдалану).
Нақты уақыттағы ПТР праймерін жобалау принциптері
Алға және кері праймер
Нақты уақыттағы ПТР үшін праймер дизайны өте маңызды.Праймерлер ПТР күшейтудің ерекшелігі мен тиімділігіне байланысты және келесі принциптерге сілтеме жасай отырып жобалануы мүмкін:
- Праймер ұзындығы: 18-30б.
- GC мазмұны: 40-60%.
- Tm мәні: Primer 5 сияқты праймерді жобалау бағдарламалық құралы праймердің Tm мәнін бере алады.Жоғарғы және төменгі ағынды праймерлердің Tm мәндері мүмкіндігінше жақын болуы керек.Tm есептеу формуласын да қолдануға болады: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).ПТР жүргізген кезде, әдетте, жасыту температурасы ретінде праймер Tm мәнінен 5 °C төмен температура таңдалады (жасыту температурасының сәйкес жоғарылауы ПТР реакциясының ерекшелігін арттыруы мүмкін).
- Праймерлер мен ПТР өнімдері:
- Жобалық праймер ПТР күшейту өнімінің ұзындығы жақсырақ 100-150 бит.
- Үлгінің қайталама құрылымдық аймағындағы дизайн праймерлерінен мүмкіндігінше аулақ болу керек.
- Жоғарғы және төменгі ағынды праймерлердің 3′ ұштары арасында 2 немесе одан да көп қосымша негіздердің пайда болуына жол бермеңіз.
- Primer 3′ терминал негізі 3 қосымша қатарынан G немесе C болуы мүмкін емес.
- Праймерлердің өздері қосымша құрылымдарға ие бола алмайды, әйтпесе ПТР күшейтуге әсер ететін шаш қыстырғыш құрылымы пайда болады.
- ATCG праймер тізбегінде мүмкіндігінше біркелкі таратылуы керек, ал 3′ терминалды негізді T ретінде болдырмау керек.
Қосымша1:CтікелейRT-qPCR Жинақ құрамдас бөлігіt қосымша пакет
1.Жасуша лизисі ерітіндісі
| Жасушаның лизисі ерітіндісі | |||
| Жинақтың құрамдас бөліктері (24 ұңғыма лизис жүйесі / ұңғыма) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| БөлімI | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| БөлімII | ДНҚ өшіргіш | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Микс | |
| Жинақтың құрамдас бөліктері (20 мкл реакция жүйесі) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Тікелей RT микс | 800 мкл |
| RNase жоқ ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR қоспасы | ||
| Жинақтың құрамдас бөліктері (20 мкл реакция жүйесі) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Тікелей qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× ROX анықтамалық бояуы | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase жоқ ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Нұсқаулықтар:
