page_banner

Cell Direct RT qPCR жинағы—SYBR GREEN I

Жинақ сипаттамасы:

◮ Қарапайым және тиімді: Cell Direct RT технологиясымен РНҚ үлгілерін небәрі 7 минутта алуға болады.

Үлгіге сұраныс аз, 10 ұяшықты сынауға болады.

◮Жоғары өткізу қабілеті: ол 384, 96, 24, 12, 6 шұңқырлы пластинкаларда өсірілген жасушаларда РНҚ-ны тез анықтай алады.

DNA Eraser босатылған геномдарды тез жоя алады, кейінгі эксперимент нәтижелеріне әсерді айтарлықтай азайтады.

Оңтайландырылған RT және qPCR жүйесі екі сатылы RT-PCR кері транскрипциясын тиімдірек етеді, ал ПТР нақтырақ және RT-qPCR реакция ингибиторларына төзімдірек етеді.

алдын ала күш


Өнімнің егжей-тегжейі

Өнім тегтері

Жиі қойылатын сұрақтар

Сипаттамалар

Бұл жинақта RT-qPCR реакциялары үшін өсірілген жасуша үлгілерінен РНҚ-ны жылдам босатуға мүмкіндік беретін бірегей лизис буферлік жүйесін пайдаланады, осылайша көп уақытты қажет ететін және көп күш жұмсайтын РНҚ тазарту процесін жояды.РНҚ үлгісін небәрі 7 минутта алуға болады.5×Тікелей RT араластыру және 2×Жинақпен қамтамасыз етілген тікелей qPCR Mix-SYBR реагенттері нақты уақыттағы сандық ПТР нәтижелерін жылдам және тиімді түрде ала алады.

5×Тікелей RT араластыру және 2×Тікелей qPCR Mix-SYBR ингибиторларға төзімділікке ие және үлгілердің лизаты тікелей RT-qPCR үшін үлгі ретінде пайдаланылуы мүмкін.Бұл жинақта бірегей РНҚ жоғары аффинді Foregene кері транскриптазасы және ыстық D-Taq ДНҚ полимеразасы, dNTPs, MgCl бар.2, реакция буфері, ПТР оптимизаторы және тұрақтандырғыш.

Техникалық сипаттамалар

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Жинақтың құрамдас бөліктері

I бөлім

Буфер CL

Foregene Protease Plus II

Буфер ST

II бөлім

ДНҚ өшіргіш

5× Тікелей RT микс

2× Тікелей qPCR Mix-SYBR

50× ROX анықтамалық бояуы

RNase жоқ ddH2O

Нұсқаулар

Ерекшеліктер мен артықшылықтар

Қарапайым және тиімді: Cell Direct RT технологиясымен РНҚ үлгілерін небәрі 7 минутта алуға болады.

■ Үлгіге сұраныс аз, 10 ұяшықты сынауға болады.

■ Жоғары өткізу қабілеті: ол 384, 96, 24, 12, 6 шұңқырлы пластиналарда өсірілген жасушалардағы РНҚ-ны тез анықтай алады.

■ DNA Eraser босатылған геномдарды жылдам жоя алады, кейінгі эксперимент нәтижелеріне әсерді айтарлықтай азайтады.

■ Оңтайландырылған RT және qPCR жүйесі екі сатылы RT-PCR кері транскрипциясын тиімдірек етеді, ал ПТР нақтырақ және RT-qPCR реакция ингибиторларына төзімдірек етеді.

Жинақ қолданбасы

Қолдану аясы: өсірілген жасушалар.

- Үлгі лизисі арқылы шығарылған РНҚ: тек осы жинақтың RT-qPCR үлгісіне қолданылады.

- Жинақ келесі мақсаттарда пайдаланылуы мүмкін: ген экспрессиясын талдау, siRNA арқылы генді өшіру әсерін тексеру, дәрілік скрининг және т.б.

Диаграмма

Cell Direct RT qPCR диаграммасы

Сақтау және сақтау мерзімі

Бұл жинақтың I бөлігін 4℃ температурада сақтау керек;II бөлікті -20℃ температурада сақтау керек.

 Foregene Protease Plus II 4 температурада сақталуы керек℃, -20℃ температурада қатып қалмаңыз.

 Реагент 2×Тікелей qPCR Mix-SYBR -20 температурада сақталуы керекқараңғыда;жиі пайдаланылса, оны 4-те де сақтауға болады℃ қысқа мерзімді сақтау үшін (10 күн ішінде пайдалану).


  • Алдыңғы:
  • Келесі:

  • Нақты уақыттағы ПТР праймерін жобалау принциптері

    Алға және кері праймер

    Нақты уақыттағы ПТР үшін праймер дизайны өте маңызды.Праймерлер ПТР күшейтудің спецификасы мен тиімділігіне байланысты және келесі принциптерге сілтеме жасай отырып жобалануы мүмкін:

    Праймер ұзындығы: 18-30б.

    GC мазмұны: 40-60%.

    Tm мәні: Primer 5 сияқты праймерді жобалау бағдарламалық құралы праймердің Tm мәнін бере алады.Жоғарғы және төменгі ағынды праймерлердің Tm мәндері мүмкіндігінше жақын болуы керек.Tm есептеу формуласын да қолдануға болады: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).ПТР жүргізген кезде, әдетте, жасыту температурасы ретінде праймердің Tm мәнінен 5 °C төмен температура таңдалады (жасыту температурасының сәйкес жоғарылауы ПТР реакциясының ерекшелігін арттыруы мүмкін).

    Праймерлер мен ПТР өнімдері:

    Жобалық праймер ПТР күшейту өнімінің ұзындығы жақсырақ 100-150 бит.

    Үлгінің қайталама құрылымдық аймағындағы дизайн праймерлерінен мүмкіндігінше аулақ болу керек.

    Жоғарғы және төменгі ағынды праймерлердің 3′ ұштары арасында 2 немесе одан да көп қосымша негіздердің пайда болуына жол бермеңіз.

    Primer 3′ терминал негізі 3 қосымша қатарынан G немесе C болуы мүмкін емес.

    Праймерлердің өздері қосымша құрылымдарға ие бола алмайды, әйтпесе ПТР күшейтуге әсер ететін шаш қыстырғыш құрылымы пайда болады.

    ATCG праймер тізбегінде мүмкіндігінше біркелкі бөлінуі керек, ал 3′ терминал негізін T ретінде болдырмау керек.

    1-қосымша:Cell Direct RT-qPCR Kit құрамдастарының қосымша бумасы

    1.Жасушаның лизисі ерітіндісі


    Жасушаның лизисі ерітіндісі

    Жинақтың құрамдас бөліктері

    (24 ұңғыма лизис жүйесі / ұңғыма)

    DRT-01011-A1

    DRT-01011-A2

    100 Т

    500 Т

    БөлімI

    Буфер CL

    20 мл

    100 мл

    Foregene Protease Plus II

    400 мкл

    1 мл × 2

    Буфер ST

    1 мл × 2

    10 мл

    БөлімII

    ДНҚ өшіргіш

    400 мкл

    1 мл × 2

    2.RT Микс


    RT Микс

    Жинақтың құрамдас бөліктері

    (20 мкл реакция жүйесі)

    DRT-01011-B1

    200 Т

    5× Тікелей RT микс

    800 мкл

    RNase жоқ ddH2O

    1,7 мл × 2

     

    3.qPCR қоспасы


    qPCR қоспасы

    Жинақтың құрамдас бөліктері

    (20 мкл реакция жүйесі)

    DRT-01011-C1

    DRT-01011-C2

    200 Т

    1000 Т

    2× Тікелей qPCR Mix-SYBR

    1 мл × 2

    1,7 мл × 6

    50× ROX анықтамалық бояуы

    40 мкл

    200 мкл

    RNase жоқ ddH2O

    1,7 мл

    10 мл

    Хабарламаңызды осы жерге жазып, бізге жіберіңіз

    БайланыстыӨнімдер