Animal Tissue Direct ПТР жинағы-UNG (Үлгі алу құралдарысыз) Протоколы
Жинақ сипаттамасы:
ДНҚ-ны бөлек экстракциялаусыз, жылдам және жоғары сезімталдықпен ПТР күшейту үшін шаблон ретінде жануар тінінің лизатын тікелей пайдаланыңыз.Жалған позитивтерді жою үшін UNG ластануға қарсы жүйесі қосылды.
◮Уақытты қажет ететін және қымбат ДНҚ тазарту қажет емес.
◮Үлгі сұранысы аз, тек бір тұқым алыңыз.
◮Ұнтақтау және ұсақтау сияқты арнайы өңдеулер қажет емес, операция қарапайым.
◮Оңтайландырылған ПТР жүйесі ПТР реакциясының тежегіштеріне жоғары спецификалық және күшті төзімділікке ие болуға мүмкіндік береді.
Сипаттамалар
Бұл жинақ ПТР реакциялары үшін жануарлар тінінің үлгілерінен геномдық ДНҚ-ны жылдам шығару үшін бірегей лизис буферлік жүйесін пайдаланады, сондықтан ол кең ауқымды генетикалық сынақтар үшін өте қолайлы.
Лизис буферінен геномдық ДНҚ-ны босату процесі 65°С температурада 10-30 минут ішінде аяқталады.Ақуыз және РНҚ-ны жою сияқты басқа процестер қажет емес, және бөлінген ДНҚ ізін ПТР реакциясы үшін үлгі ретінде пайдалануға болады.
2×ПТР оңайTMMix (UNG) 2×PCR Easy негізінде dTTP орнына dUTP пайдаланадыTMБір уақытта құрамында dUTP бар шаблонды бұзатын UNG ферментін (Урацил-N-гликозилаза) араластырыңыз және қосады.ПТР реакциясына дейін UNG ферменті құрамында урацил бар ПТР өнімін ыдырату үшін қолданылады.UNG ферменті құрамында урацил жоқ шаблонға ешқандай әсер етпейді, осылайша күшейтудің ерекшелігі мен дәлдігін қамтамасыз етеді және кең ауқымды генетикалық тестілеу кезінде ПТР өнімдерінің ластану мүмкіндігін болдырмайды.
D-Taq ДНҚ полимеразасы - тікелей ПТР реакциялары үшін Foregene арнайы әзірлеген ДНҚ полимераза.D-Taq ДНҚ полимеразасы әртүрлі ПТР реакция ингибиторларына күшті төзімділікке ие және әртүрлі күрделі реакция жүйелеріндегі ДНҚ-ның іздік мөлшерін тиімді түрде күшейте алады және күшейту жылдамдығы 2Кб/мин жетуі мүмкін, бұл әсіресе тікелей ПТР реакциясы үшін қолайлы.
Жинақтың құрамдас бөліктері
| I бөлім | AL буфері |
| Форгендік протеаза | |
| 6× ДНҚ жүктеу буфері | |
| II бөлім | 2×ПТР оңайTMМикс(UNG) |
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■Уақытты және қымбат ДНҚ тазартуды қажет етпейді
■ Үлгіге сұраныс аз, 5 мг жануар тінін сынауға болады.
■ Ұнтақтау және ұсақтау сияқты арнайы өңдеу қажет емес және операция қарапайым.
■ Оңтайландырылған ПТР жүйесі ПТР реакциясының тежегіштеріне жоғары спецификалық және күшті төзімділікке ие етеді.
■ Ластануға қарсы ПТР жүйесі 2×ПТР оңайTMМикс (UNG) ПТР өнімдерінен туындаған ластануды тиімді жояды және күшейтудің ерекшелігі мен дәлдігін қамтамасыз етеді.
Жинақ параметрлері
Қолданылуы: жануарлардың әртүрлі ұлпалары.
Үлгі лизисінен бөлінген ДНҚ: тек ПТР үлгісі ретінде пайдаланылады.
Жинақ келесі мақсаттарда қолданылуы мүмкін: трансгенозды анықтау, жануарларды генотиптеу және т.б.
Жұмыс барысы
Сақтау және сақтау мерзімі
Бұл жинақтың I бөлігін 2-8-де сақтау керек℃.
Buffer AL реагентін құрғақ жағдайда 12 ай сақтауға болады;оны 2-8-де сақтауға болады℃ұзағырақ сақтау үшін.
Foregene Protease реагентінің бірегей формуласы бар.Оның белсенділігі мен тұрақтылығын қамтамасыз ету үшін оны 4-те сақтаңыз℃12 айға.
Реагент 6×ДНҚ жүктеу буферін 4-те сақтауға болады℃немесе -20℃узақ уақытқа.
Бұл жинақтың II бөлігін -20 температурада сақтау керек℃.
Реагент 2×ПТР оңайTMMix(UNG), егер ол жиі қолданылса, оны 4-те де сақтауға болады℃қысқа мерзімді сақтау үшін (10 күн ішінде пайдалану).
