Тікелей RT-qPCR жинағы III
Жинақ сипаттамасы:
◮Бірегей реакция буфері бар Foregene әзірлеген Foreasy кері транскриптаза мен Foreasy HS Taq ДНҚ полимеразасын қолданатын тікелей RT-qPCR жинағы бұл жинақты күшті қарсылық пен үйлесімділікпен жасайды және ол Foregene Lysis жүйесін үлгі ретінде реакцияны пайдалануды тікелей сынай алады.Бұл жинақ COVID-19 нуклеин қышқылын анықтау жинағын және басқа патогенді бактерияларды нуклеин қышқылын анықтау жинағын әзірлеу үшін қолданылуы мүмкін.
Сипаттама
Тікелей RT-qPCR жинағы бөлек оралған RT-qPCR буферін (Foreasy HS Taq ДНҚ полимераза араласқан) және жоғары тиімділікті қамтамасыз етеді.Болжамды кері транскриптаза (MMLV),оны қарапайым тексеру аясында жүйені реттеуге және артқы жинақтарды жасауға ыңғайлы етеді.
Бірегей реакция буфері бар Foregene әзірлеген Foreasy кері транскриптаза мен Foreasy HS Taq ДНҚ полимеразасын қолданатын тікелей RT-qPCR жинағы бұл жинақты күшті қарсылық пен үйлесімділікпен жасайды және ол Foregene Lysis жүйесін үлгі ретінде реакцияны пайдалануды тікелей сынай алады.Бұл жинақ COVID-19 нуклеин қышқылын анықтау жинағын және басқа патогенді бактерияларды нуклеин қышқылын анықтау жинағын әзірлеу үшін қолданылуы мүмкін.
Бұл жинақ оңай және жылдам пайдалана отырып, тікелей IVD өнімінің құрамдас бөлігі бола алады.Оны қайта дамытпай, оңай тексеру қажет.
Техникалық сипаттамалар
500Т, 50000Т
Жинақтың құрамдас бөліктері
| Жинақтың мазмұны (20 мкл реакция жүйесі) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 Т | 50 000 Т | |
| Болжамды Ркері транскриптаза(200 U/μL) | 50 мкл×1 | 1 мл×5 |
| 2× Тікелей qPCRМикс-тақман | 1 мл ×5 | 500 мл×1 |
| Нұсқау | 1 | 1 |
Жұмыс қадамдары
A: Үлгі мен реагентті дайындаңыз
1. Дайындалған РНҚ үлгісін (РНҚ үлгісін шығарып алу және тазарту үшін Foregene Total RNA оқшаулау жинағы сериясы жинағын пайдалану ұсынылады) немесе үлгі крекинг өнімін (Foregene Lysis жүйесін пайдалану ұсынылады), арнайы праймерлерді (10 мкм) және басқа тиісті шығын материалдарын, құралды дайындаңыз.
2. 2× Direct RT-qPCR буферін, RNase-Free ddH2O және 20× ROX анықтамалық бояуын (қажет болса) мұзы бар қорапқа салып, оларды табиғи түрде балқытып, ақырын араластырыңыз.
B: RT-qPCR жүйесін дайындаңыз
Реакциялық жүйенің реакция буферінің көлемінің жартысын алыңыз (мысалы, жүйенің көлемі 20 мкл болса, оған 10 мкл 2 × Direct RT-qPCR буферін алу керек)). Үшінферменттің сәйкес мөлшері, біз мұны ұсынамызM-MLV: 10-30 U/20 мкл реакция жүйесі,ТакДНҚ полимераза:1-2 U/20 мкл реакция жүйесібұл біздің ұсынысымыз, сіз оны тексеріп, реттеуіңіз керек), РНҚ үлгісін, арнайы праймерлер мен зондтарды қосыңыз және RNase-Free ddH қосыңыз2O - 20 мкл.RT-qPCR реакция жүйесінің арнайы дайындығын келесі 1-кестеге жатқызуға болады.
1-кесте: RT-qPCR жүйесін дайындаңыз
| Құрамдас | Көлемі | Соңғы концентрация |
| 2× Тікелей RT-qPCR буфері | 10 мкл | 1× |
| Болжамды кері транскриптаза (MMLV) | 10-30 U | |
| Алдын ала HS Taq ДНҚ полимеразасы | 1-2 U | |
| Алға праймер (10 мкм) | 0,8 мкл | 50-900нМ |
| Кері праймер (10 мкм) | 0,8 мкл | 50-900нМ |
| Зонд (4 мкм) | 1 мкл | 200нМ |
| Үлгі (РНҚ немесе Лизат) | X мкл | |
| 20× ROX анықтамалық бояуы | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) мкл | |
| Жалпы көлемі | 20 мкл |
Ескертпе: Forward Primer және Reverse Primer мақсатты геннің арнайы праймерлері болып табылады.qPCR жүйесін тәжірибелік эксперименттік және ПТР үлгілеріне сәйкес реттеуге болады.Көптеген праймерлердің соңғы концентрациясы үшін 400 нМ ұсынамыз.Дайындалған концентрацияға және ұсынылған соңғы концентрацияға сәйкес арнайы праймерлер мен зондтардың көлемін реттеңіз.
1*: әртүрлі сандық ПТР құралдарына сәйкес ROX анықтамалық бояуының қолайлы соңғы концентрациясын таңдаңыз.Жалпы сандық ПТР құралдарының оңтайлы ROX Reference Dye концентрациясы келесі кестеде көрсетілген:
| Сандық ПТР құралдары | ROX анықтамалық бояуының соңғы концентрациясы |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Бірінші қадам,т.б. | 1× (мысалы, 20 мкл реакция жүйесіне 1 мкл 20×ROX анықтамалық бояуын қосыңыз) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P және Mx4000 және т.б. | 0,5× (мысалы, 20 мкл реакция жүйесіне 0,5 мкл 20×ROX анықтамалық бояуын қосыңыз) |
| Roche ПТР құралы, Bio-Rad ПТР құралы, Эппендорф сандық ПТР құралы және т.б. | ROX анықтамалық бояусыз |
Сақтау және сақтау мерзімі
Жинақты -20 ± 5 ℃ температурада сақтау керек.Оны дереу -20℃ термостатикалық тоңазытқышта сақтау керек.Жарамды жағдайда сақталса, жарамдылық мерзімі 2 жыл.
