Cell Direct RT qPCR жинағы—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready бір қадамды qRT-PCR жинақтары зонды
Сипаттамалар
Бұл өнім RT-qPCR реакциялары үшін өсірілген жасуша үлгілерінен РНҚ-ны жылдам шығару үшін бірегей лизис буферлік жүйесін пайдаланады, бұл көп уақытты қажет ететін және көп еңбекті қажет ететін РНҚ тазарту процесін болдырмайды және 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman көмегімен қажетті РНҚ үлгісін алу үшін небәрі 7 минут қажет.
5× Direct RT Mix және 2× Direct qPCR Mix-Taqman ингибиторларға күшті төзімділікке ие және үлгі ретінде өлшенетін үлгі лизатының көмегімен тиімді кері айналдыруды және арнайы күшейтуді орындай алады.Реагент құрамында Foregene кері транскриптаза, ыстық D-Taq ДНҚ полимераза, dNTPs, MgCl бар.2, Реакция буфері, ПТР оңтайландырғышы және тұрақтандырғыш, үлгілерді жылдам және оңай анықтау үшін лизис буферімен бірге пайдалануға болады және жоғары сезімталдық, ерекшелік және тұрақтылық сипаттамалары бар.
Техникалық сипаттамалар
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Жинақтың құрамдас бөліктері
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Жинақтың құрамдас бөліктері 20 мкл qPCR реакция жүйесі | DRT-01021 | DRT-01022 | Ескерту | |
| 200 Т | 1000 Т | |||
|
Бөлім I | Буфер CL | 4 мл | 20 мл | Жасушаның лизисі |
| Foregene Protease Plus II | 80 мкл | 400 мкл | ||
| Буфер ST | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
|
Бөлім II | ДНҚ өшіргіш | 80 мкл | 400 мкл | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | qPCR | |
| 20×ROX анықтамалық бояу | 40 мкл | 200 мкл | ||
| RNase жоқ ddH2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Нұсқаулық | 1 дана | 1 дана | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman бөлек сатып алуға болады
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■Қарапайым және тиімді: Cell Direct RT технологиясымен РНҚ үлгілерін небәрі 7 минутта алуға болады.
■ Үлгіге сұраныс аз, 10 ұяшықты сынауға болады.
■ Жоғары өткізу қабілеттілігі: ол 384, 96, 24, 12, 6 шұңқырлы пластиналарда өсірілген жасушалардағы РНҚ-ны жылдам анықтай алады.
■ DNA Eraser босатылған геномдарды жылдам жоя алады, кейінгі эксперимент нәтижелеріне әсерді айтарлықтай азайтады.
■ Оңтайландырылған RT және qPCR жүйесі екі сатылы RT-PCR кері транскрипциясын тиімдірек етеді, ал ПТР нақтырақ және RT-qPCR реакция ингибиторларына төзімдірек етеді.
Жинақ қолданбасы
Қолдану аясы: өсірілген жасушалар.
- Үлгі лизисі арқылы шығарылған РНҚ: тек осы жинақтың RT-qPCR үлгісіне қолданылады.
- Жинақ келесі мақсаттарда пайдаланылуы мүмкін: ген экспрессиясын талдау, siRNA арқылы генді өшіру әсерін тексеру, дәрілік скрининг және т.б.
Сақтау және сақтау мерзімі
Бұл жинақтың I бөлігін 4-те сақтау керек℃;II бөлікті -20℃ температурада сақтау керек.
Foregene Protease Plus II 4 температурада сақталуы керек℃, -20℃ температурада қатып қалмаңыз.
Реагент 2×Тікелей qPCR Mix-Taqman -20 температурада сақталуы керек℃қараңғыда;жиі пайдаланылса, оны 4-те де сақтауға болады℃ қысқа мерзімді сақтау үшін (10 күн ішінде пайдалану).
Нақты уақыттағы ПТР праймерін жобалау принциптері
Алға және кері праймер
Нақты уақыттағы ПТР үшін праймер дизайны өте маңызды.Праймерлер ПТР күшейтудің ерекшелігі мен тиімділігіне байланысты және келесі принциптерге сілтеме жасай отырып жобалануы мүмкін:
- Праймер ұзындығы: 18-30б.
- GC мазмұны: 40-60%.
- Tm мәні: Primer 5 сияқты праймерді жобалау бағдарламалық құралы праймердің Tm мәнін бере алады.Жоғарғы және төменгі ағынды праймерлердің Tm мәндері мүмкіндігінше жақын болуы керек.Tm есептеу формуласын да қолдануға болады: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).ПТР жүргізген кезде, әдетте, жасыту температурасы ретінде праймер Tm мәнінен 5 °C төмен температура таңдалады (жасыту температурасының сәйкес жоғарылауы ПТР реакциясының ерекшелігін арттыруы мүмкін).
- Праймерлер мен ПТР өнімдері:
- Жобалық праймер ПТР күшейту өнімінің ұзындығы жақсырақ 100-150 бит.
- Үлгінің қайталама құрылымдық аймағындағы дизайн праймерлерінен мүмкіндігінше аулақ болу керек.
- Жоғарғы және төменгі ағынды праймерлердің 3′ ұштары арасында 2 немесе одан да көп қосымша негіздердің пайда болуына жол бермеңіз.
- Primer 3′ терминал негізі 3 қосымша қатарынан G немесе C болуы мүмкін емес.
- Праймерлердің өздері қосымша құрылымдарға ие бола алмайды, әйтпесе ПТР күшейтуге әсер ететін шаш қыстырғыш құрылымы пайда болады.
- ATCG праймер тізбегінде мүмкіндігінше біркелкі таратылуы керек, ал 3′ терминалды негізді T ретінде болдырмау керек.
Қосымша1:CтікелейRT-qPCR Жинақ құрамдас бөлігіt қосымша пакет
1.Жасуша лизисі ерітіндісі
| Жасушаның лизисі ерітіндісі | |||
| Жинақтың құрамдас бөліктері (24 ұңғыма лизис жүйесі / ұңғыма) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| БөлімI | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| БөлімII | ДНҚ өшіргіш | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Микс | |
| Жинақтың құрамдас бөліктері (20 мкл реакция жүйесі) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Тікелей RT микс | 800 мкл |
| RNase жоқ ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR қоспасы | ||
| Жинақтың құрамдас бөліктері (20 мкл реакция жүйесі) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Тікелей qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× ROX анықтамалық бояуы | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase жоқ ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Нұсқаулықтар:
