Күшейту сигналдары жоқ

1. Жинақтағы Taq DNA Polymerase дұрыс сақталмау немесе жинақтың жарамдылық мерзімінің өтуіне байланысты белсенділігін жоғалтады.
Ұсыныс: Жинақты сақтау шарттарын растаңыз;ПТР жүйесіне Taq DNA Polymerase тиісті мөлшерін қайта қосыңыз немесе сәйкес эксперименттер үшін жаңа нақты уақыттағы ПТР жинағын сатып алыңыз.

2.ДНҚ үлгісінде Taq DNA Polimerase ингибиторлары көп.
Ұсыныс: Үлгіні қайта тазалаңыз немесе пайдаланылатын үлгі мөлшерін азайтыңыз.

3. Mg2+ концентрациясы қолайлы емес.
Ұсыныс: Біз ұсынатын 2× Нақты ПТР қоспасының Mg2+ концентрациясы 3,5 мМ.Дегенмен, кейбір арнайы праймерлер мен шаблондар үшін Mg2+ концентрациясы жоғары болуы мүмкін.Сондықтан Mg2+ концентрациясын оңтайландыру үшін тікелей MgCl2 қосуға болады.Оңтайландыру үшін әр жолы Mg2+ 0,5 мМ арттыру ұсынылады.

4. ПТР күшейту шарттары қолайлы емес және праймер реттілігі немесе концентрациясы дұрыс емес.
Ұсыныс: праймер тізбегінің дұрыстығын және праймер бұзылмағанын растаңыз;күшейту сигналы жақсы болмаса, жасыту температурасын төмендетіп, праймер концентрациясын сәйкесінше реттеп көріңіз.

5. Үлгі мөлшері тым аз немесе тым көп.
Ұсыныс: Үлгіні сызықтандыру градиентті сұйылтуды орындаңыз және нақты уақыттағы ПТР тәжірибесі үшін ең жақсы ПТР әсері бар үлгі концентрациясын таңдаңыз.

NTC флуоресценция мәні тым жоғары

1. Жұмыс кезінде пайда болатын реагенттердің ластануы.
Ұсыныс: Нақты уақыттағы ПТР тәжірибелері үшін жаңа реагенттермен ауыстырыңыз.

2. ПТР реакция жүйесін дайындау кезінде ластану орын алды.
Ұсыныс: Жұмыс кезінде қажетті қорғаныс шараларын орындаңыз, мысалы: латекс қолғап кию, сүзгісі бар тамшуыр ұшын пайдалану және т.б.

3.Праймерлер нашарлайды, ал праймерлердің деградациясы спецификалық емес күшейтуді тудырады.
Ұсыныс: праймерлердің бұзылғанын анықтау үшін SDS-PAGE электрофорезін пайдаланыңыз және оларды нақты уақыттағы ПТР тәжірибелері үшін жаңа праймерлермен ауыстырыңыз.

Праймер димері немесе спецификалық емес күшейту

1. Mg2+ концентрациясы қолайлы емес.
Ұсыныс: Біз ұсынатын 2× Real PCR EasyTM қоспасының Mg2+ концентрациясы 3,5 мМ.Дегенмен, кейбір арнайы праймерлер мен шаблондар үшін Mg2+ концентрациясы жоғары болуы мүмкін.Сондықтан Mg2+ концентрациясын оңтайландыру үшін тікелей MgCl2 қосуға болады.Оңтайландыру үшін әр жолы Mg2+ 0,5 мМ арттыру ұсынылады.

2. ПТР жасыту температурасы тым төмен.
Ұсыныс: ПТР жасыту температурасын әр уақытта 1℃ немесе 2℃ арттырыңыз.

3. ПТР өнімі тым ұзын.
Ұсыныс: Нақты уақыттағы ПТР өнімінің ұзындығы 100-150 бит, 500 бит аспауы керек.

4.Праймерлер деградацияланады, ал праймерлердің деградациясы ерекше күшейтудің пайда болуына әкеледі.
Ұсыныс: праймерлердің бұзылғанын анықтау үшін SDS-PAGE электрофорезін пайдаланыңыз және оларды нақты уақыттағы ПТР тәжірибелері үшін жаңа праймерлермен ауыстырыңыз.

5. ПТР жүйесі дұрыс емес немесе жүйе тым кішкентай.
Ұсыныс: ПТР реакция жүйесі тым кішкентай болса, анықтау дәлдігі төмендейді.Нақты уақыттағы ПТР тәжірибесін қайта орындау үшін сандық ПТР құралы ұсынған реакция жүйесін қолданған дұрыс.

Сандық мәндердің нашар қайталануы

1. Құрал дұрыс жұмыс істемейді.
Ұсыныс: Құралдың әрбір ПТР тесігі арасында қателер болуы мүмкін, бұл температураны басқару немесе анықтау кезінде нашар қайталануға әкеледі.Сәйкес құралдың нұсқауларына сәйкес тексеріңіз.

2. Үлгі тазалығы жақсы емес.
Ұсыныс: Таза емес үлгілер үлгі мен праймерлердің тазалығын қамтитын эксперименттің нашар қайталану мүмкіндігіне әкеледі.Үлгіні қайта тазартқан дұрыс, ал праймерлерді SDS-PAGE арқылы тазартқан дұрыс.

3. ПТР жүйесін дайындау және сақтау уақыты тым ұзақ.
Ұсыныс: ПТР тәжірибесі үшін нақты уақыттағы ПТР жүйесін дайындалғаннан кейін бірден пайдаланыңыз және оны тым ұзақ қалдырмаңыз.

4. ПТР күшейту шарттары қолайлы емес және праймер реттілігі немесе концентрациясы дұрыс емес.
Ұсыныс: праймер тізбегінің дұрыстығын және праймер бұзылмағанын растаңыз;күшейту сигналы жақсы болмаса, жасыту температурасын төмендетіп, праймер концентрациясын сәйкесінше реттеп көріңіз.

5. ПТР жүйесі дұрыс емес немесе жүйе тым кішкентай.
Ұсыныс: ПТР реакция жүйесі тым кішкентай болса, анықтау дәлдігі төмендейді.Нақты уақыттағы ПТР тәжірибесін қайта орындау үшін сандық ПТР құралы ұсынған реакция жүйесін қолданған дұрыс.