Полисахаридтер мен полифенолдарға бай өсімдіктерге арналған жалпы РНҚ изоляциясы жинағы Plus жалпы РНҚ тазарту жинағы
Жинақ сипаттамасы:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Құрамында жоғары полисахарид және полифенол компоненттері бар жалпы өсімдік үлгілерінен жалпы РНҚ тазарту үшін.
Құрамында полисахаридтер мен полифенолдардың көп мөлшері бар өсімдік үлгілерінен жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны жылдам шығарып алыңыз.
РНазсыз ДНҚ-тазалау бағанасын пайдалану
Қарапайым—барлық операциялар бөлме температурасында орындалады
Жылдам — операцияны 30 минутта аяқтауға болады
Қауіпсіз – органикалық реагент пайдаланылмайды 
Техникалық сипаттамалар
50 дайындық, 200 дайындық
Жинақ құрамында полисахаридтері немесе полифенолдары жоғары әртүрлі өсімдік тіндерінен жоғары таза және жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны тиімді шығарып алатын Foregene әзірлеген айналдыру бағанасы мен формуласын пайдаланады.Ол супернатант пен тін лизатынан геномдық ДНҚ-ны оңай алып тастай алатын ДНҚ-тазалау бағанасын қамтамасыз етеді.Тек РНҚ бағанасы РНҚ-ны тиімді байланыстыра алады.Жинақ бір уақытта көптеген үлгілерді өңдей алады.
Бүкіл жүйеде RNase жоқ, сондықтан тазартылған РНҚ бұзылмайды.PRW1 буфері және PRW2 буфері алынған РНҚ ақуыз, ДНҚ, иондар және органикалық қосылыстармен ластанбауын қамтамасыз ете алады.
Жинақтың құрамдас бөліктері
| PSL1 буфері, PS буфері, PSL2 буфері |
| PRW1 буфері, PRW2 буфері |
| RNase жоқ ddH2O, ДНҚ-тазалау бағанасы |
| Тек РНҚ-баған |
Ерекшеліктер мен артықшылықтар
■ Бүкіл процесс бойы бөлме температурасында (15-25℃) жұмыс, мұзды ваннасыз және төмен температурада центрифугасыз.
■ RNase-Free толық жиынтығы, РНҚ деградациясына алаңдаудың қажеті жоқ.
■ Полисахаридтер мен полифенолдардың өсімдік үлгілерінен РНҚ тазарту үшін әсіресе қолайлы.
■ ДНҚ-тазалау бағанасы ДНҚ-мен арнайы байланысады, осылайша жинақ DNase қоспай-ақ геномдық ДНҚ ластануын жоя алады.
■ Жоғары РНҚ шығымы: тек РНҚ-бағаны және бірегей формула РНҚ-ны тиімді тазарта алады.
■ Жылдам жылдамдық: пайдалану оңай және оны 30 минут ішінде аяқтауға болады.
■ Қауіпсіздік: органикалық реагент қажет емес.
■ Жоғары сапа: Тазартылған РНҚ фрагменттері жоғары тазалықта, ақуыз және басқа қоспалардан таза және әр түрлі тәжірибелік қолданбаларға жауап бере алады.
Өнімнің параметрлері
■ Төменгі қолданбалар: бірінші тізбекті cDNA синтезі, RT-PCR, молекулалық клондау, Northern Blot және т.б.
■ Үлгі: полисахаридтер мен полифенолдардың жаңа немесе мұздатылған өсімдік тіндері
■ Дозасы: 50 мг өсімдік ұлпасы
■ Тазарту бағанының РНҚ байланыстырудың максималды сыйымдылығы: 80 мкг
■ Элюция көлемі: 50-200 мкл
Жинақ қолданбасы
Ол жоғары полисахарид пен полифенол мөлшері бар жаңа немесе мұздатылған өсімдік тінінің үлгілерінен (әсіресе жаңа өсімдік жапырағы ұлпасынан) жалпы РНҚ-ны алу және тазарту үшін жарамды.
Жұмыс барысы
Диаграмма
Plant Total RNA Isolation Kit Plus полисахаридтер мен полифенолдардың 50 мг жаңа жапырақтарын өңдеді және 5% тазартылған РНҚ электрофорез арқылы тексерілді.
1: банан
2: гинкго
3: Мақта
4: Анар
Сақтау және сақтау мерзімі
Бұл жинақты құрғақ жағдайда бөлме температурасында (15-25℃) 24 ай бойы сақтауға болады;ұзақ уақыт сақтау қажет болса, оны 2–8℃ температурада сақтауға болады.
PSL1 буферін β-меркаптоэтанол қосқаннан кейін 1 ай бойы 4℃ температурада орналастыруға болады (оны тәжірибе кезінде қосу ұсынылады).
Баған бітеліп қалды
Бағанды тығындағаннан кейін РНҚ шығымы төмендейді немесе тіпті РНҚ-ны тазарту мүмкін емес, ал алынған РНҚ массасы төмен.
Жалпы себептерді талдау:
1. Үлгі үзілістер мұқият емес.
Үлгінің сынуы ДНҚ-ТАЗАЛАУ БАҒАНЫН толығымен бұғаттауға әкелмейді, сонымен бірге РНҚ кірісі мен сапасына әсер етеді.Үлгілерді сындырған кезде жеткілікті сұйық азотта жылдам ұнтақтау операциясын ұсынамыз, Үлгі жасуша қабырғасын, жасуша мембранасын және басқа тіндерді ұсақтауға тырысыңыз.Полиол полисахаридтерінің өсімдік үлгілері үшін Plant Total RNA IZOLATION KIT PLUS пайдалануды ұсынамыз.
2. Бөлінген үлгінің үстіңгі затын ДНҚ-тазалау бағанымен сору кезінде ықтимал жасуша фрагменттелген тұнбаны деммен жұтуға болады.
Алынған жасушаның бөлшектенген шөгінділері РНҚ-ны адсорбциялау операциясы орындалған кезде бітеліп қалатын ТЕК РНҚ бағанын тудырады (6-қадамды қараңыз).Жасуша қалдықтарын сорып алмау үшін осы үстіңгі затты сорған кезде мұқият болуды ұсынамыз.
3. Үлгінің бастапқы мөлшері тым көп.
Үлгіні шамадан тыс пайдалану үлгінің толық емес фрагментациясына немесе PSL1 буфері арқылы толық емес жасуша лизисіне әкеледі, бұл тазарту кезінде тазарту бағанының бітелуіне әкеледі.Зауыттың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы Әрбір тазартылған жұмыс үлгісі 50 мг құрайды.Полиол полисахаридтерінің өсімдік үлгілері үшін Plant Total RNA IZOLATION KIT PLUS қолданбасын қолданып көруді ұсынамыз.
4. Центрифуганың температурасы тым төмен.
Бүкіл РНҚ оқшаулау және тазарту процесі бөлме температурасында (20-25°C), үлгі ұлпасының сұйық азотпен бұзылуынан басқа. Кейбір криогенді центрифугалардың температурасы 20 градустан төмен.℃, бұл ДНҚ-тазалау бағанының және/немесе тек РНҚ-бағанының бітелуіне әкелуі мүмкін.Егер бұл орын алса, центрифуга температурасын 20-25 градусқа орнатыңыз℃, жәнелизис қоспасының және/немесе этанол қосылған үстіңгі заттың 37 градусқа дейін алдын ала қыздырылғанына көз жеткізіңіз.°C.
Алынған РНҚ жоқ немесе РНҚ шығымы төмен
Қалпына келтіру тиімділігіне әсер ететін әдетте көптеген факторлар бар, мысалы: үлгі РНҚ мазмұны, жұмыс әдісі, элюция көлемі және т.б.
Төмендегідей жалпы себептерді талдау:
1. Операция кезінде мұз ваннасы немесе төмен температурада (4°C) центрифугалау орындалды.
Ұсыныс: Бөлме температурасында жұмыс істеңіз (15-25°C) бүкіл процесте мұз ваннасын және төмен температурада центрифугалауды жасамаңыз.
2. Үлгіні дұрыс сақтамау немесе үлгіні ұзақ уақыт сақтау салдарынан РНҚ бұзылған.
Ұсыныс: Жаңадан жиналған үлгілерді сұйық азотта тез мұздату керек, содан кейін -80°C температурада ұзақ уақыт сақтау керек, үлгілерді қайта-қайта мұздату мен ерітуге жол бермеу керек;немесе үлгілерді РНҚ тұрақтандырғышының RNAlater ерітіндісіне (жануар үлгілері) дереу сіңіріңіз.
3. Үлгінің жеткіліксіз бөлінуі және лизисі тазарту бағанының бітелуіне әкеледі.
Ұсыныс: Тіндерді ұнтақтау кезінде тіннің жеткілікті түрде ұнтақталғанына көз жеткізіңіз және оны алдын ала дайындалған PSL1 буферіне жылдам жіберіңіз (β-ME дұрыс пропорциясы қосылғанын растаңыз, процедураның 1-қадамын қараңыз).
4. Элюент қате қосылды.
Ұсыныс: RNase-Free ddH2O тазарту бағанының мембранасының ортасына тамызылғанына көз жеткізіңіз.
5. PSL2 буферіне немесе PRW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемі қосылмаған.
Ұсыныс: Нұсқауларды орындаңыз, PSL2 буферіне және PRW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосыңыз және жинақты қолданар алдында жақсылап араластырыңыз.
6.Тін үлгісінің мөлшері сәйкес емес.
Ұсыныс: PSL1 буферінің 500 мкл үшін 50 мг ұлпаны пайдаланыңыз.Тым көп тіндерді пайдалану экстракцияланған РНҚ мөлшерін азайтады және алынған РНҚ тазалығы да төмендейді.Біз сынаманың бастапқы дозасы бір РНҚ экстракциясы операциясы үшін 50 мг-ден аспауы керек екенін қатаң түрде ұсынамыз.
7. Сәйкес емес элюция көлемі немесе толық емес элюция.
Ұсыныс: тазарту колоннасының элюент көлемі 50-200 мкл;егер элюция әсері қанағаттанарлық болмаса, алдын ала қыздырылған RNase-Free ddH2O қосқаннан кейін бөлме температурасында уақытты ұзарту ұсынылады, мысалы 5-10 мин.
8.Тазарту бағанасында BufferPRW2 жуудан кейін этанол қалдығы бар.
Ұсыныс: бос түтік 1 минут бойы центрифугаланса және PRW2 буферінде жуудан кейін әлі де этанол қалса, бос түтікті центрифугалау уақытын 2 минутқа дейін арттыруға немесе қалдық этанолды толығымен жою үшін тазарту бағанын бөлме температурасында 5 минутқа қоюға болады.
9. Жинақ дұрыс пайдаланылмады.
Ұсыныс: Полифенолды полисахаридтердің өсімдік үлгілері үшін Өсімдіктің жалпы РНҚ оқшаулау жинағы сияқты жалпы жинақтарды пайдалану тамаша РНҚ үлгілерін ала алмауы мүмкін.Полифенолды полисахаридті өсімдік үлгілері үшін арнайы әзірленген Plant Total RNA IsolationKit Plus пайдалануды ұсынамыз.Полифенол және полисахаридті өсімдік үлгілерінен РНҚ алу үшін арнайы әзірленген жинақ.
OD260/OD280 мәні төмен
ddH2O және спектрофотометр көрсеткіштері үшін пайдаланылатын РНҚ элюциясы OD260/OD280 төмен мәндеріне әкеледі.Салыстырмалы түрде дұрыс OD260/OD280 мәндерін алу үшін 10 мМ Tris-HCl, рН 7,5 (РНҚсыз ddH2O емес) пайдалануды ұсынамыз, 19-беттегі «РНҚ концентрациясы және тазарту талдаулары» қараңыз.
Тазартылған РНҚ бұзылады
Тазартылған РНҚ сапасы үлгіні сақтау, RNase ластануы және манипуляция сияқты факторларға байланысты.
Жалпы себептерді талдау:
1. Ұлпа үлгілері жинаудан кейін уақытында сақталмаған.
Ұсыныс: Егер тін үлгілері жиналғаннан кейін уақытында пайдаланылмаса, оларды төмен температурада сұйық азотта дереу сақтаңыз немесе сұйық азотта жылдам мұздатылғаннан кейін ұзақ мерзімді сақтау үшін оларды -80°C дейін ауыстырыңыз немесе үлгілерді РНҚ тұрақтандырғышының RNAlater ерітіндісіне дереу батырыңыз (жануар үлгілері).РНҚ экстракциясы үшін жаңадан жиналған тін үлгілерін пайдаланып көріңіз.
2.Ұлпа үлгілерін қайталап мұздату және еріту.
Ұсыныс: Ұлпа үлгілерін сақтау кезінде консервациялау үшін оларды кішкене бөліктерге кесіп, үлгілерді қайталап мұздату мен ерітуден туындаған РНҚ деградациясын болдырмау үшін пайдалану кезінде олардың бір бөлігін алып тастаған дұрыс.
3.RNase операция бөлмесінде енгізіледі немесе бір рет қолданылатын қолғаптар, маскалар және т.б.
Ұсыныс: РНҚ экстракциясы бойынша эксперименттер РНҚ-ның жекелеген операцияларында жақсы орындалады, ал зертханалық үстелді эксперимент алдында тазалау керек, ал РНҚ-ны ең көп мөлшерде енгізуден туындаған РНҚ деградациясын болдырмау үшін эксперимент кезінде бір реттік қолғаптар мен маскалар кию керек.
4. Пайдалану кезінде реагент RNase арқылы ластанған.
Ұсыныс: қатысты эксперименттер үшін өсімдіктің жалпы РНҚ экстракция жинақтарының жаңа сериясымен ауыстырыңыз.
5. РНҚ манипуляциясы үшін пайдаланылатын центрифуга түтіктері мен тамшуыр ұштары RNase-мен ластанған.
Ұсыныс: РНҚ экстракциясында қолданылатын центрифуга түтіктерінің, тамшуыр ұштарының, тамшуырлардың және т.б. барлығында RNase жоқ екеніне көз жеткізіңіз.
Нұсқаулықтар:
Өсімдіктің жалпы РНҚ изоляциясының жинағы Plus нұсқаулығы
