A260/A230 төмен қатынасы әдетте 230 нм ең жоғары сіңіру толқын ұзындығы бар қоспалардан туындайды.Бұл қоспаларға не кіретінін көрейік:

• Жалпы ластаушы заттар	Абсорбция толқын ұзындығы	Қатынас әсері
  Протеин	~230нм және 280нм	Бір мезгілде азаюы А260/A 280және А260/A 280қатынасы
  Гуанидин тұзы	220-240 нм	А азайтыңыз260/A 280арақатынас
  Фенол	~270нм	-
  Тризол	~230нм және 270нм	А азайтыңыз260/A 280арақатынас
  EDTA	~230нм	А азайтыңыз260/A 280арақатынас
  Этанол	230-240 нм	А азайтыңыз260/A 280арақатынас

 
 
 
Жалпы ластаушы заттардың жұтылу толқын ұзындығы және контраст мәні

Pротеинмен ластану
Протеиннің ластануын нуклеин қышқылының экстракция процесіндегі ең көп таралған ластануы ретінде қарастыруға болады.Ақуыз жоғарғы сулы фаза мен төменгі судың арасында боладыорганикалықфазасы.Ластану A260/A280 және A260/A230 арақатынасын бір уақытта азайтады, ал A260/A230 арақатынасы A260/A280 арақатынасына қарағанда айқынырақ өзгереді.
Одан кейінгі кезеңдекері транскрипцияor qPCR реакциялары, ақуыз қалдықтары фермент қызметін тежей немесе кедергі келтіруі мүмкін.Протеинмен ластануды болдырмаудың ең жақсы жолы - үстіңгі затты сору кезінде «көп емес, аз мөлшерде» принципін есте сақтау.

2. Гуанидиний ластануы
гидрохлорид (GuHCl) және гуанидинтиоцианат (GTC) ақуыздарды денатурациялау әсеріне ие, олар нуклеин қышқылының экстракция процесі кезінде жасуша мембраналарын тез бұзады, ақуыздың денатурациясын және тұндыруды тудырады.GuHCl және GTC жұтылу толқын ұзындығы 220-240 нм, алқалдық гуанидиний тұзы A260/A230 қатынасын азайтады.Қалдық гуанидиний тұзы қатынасты төмендетсе де,төменгі ағындағы эксперименттерге әсері іс жүзінде шамалы.

3. Тризолмен ластану
Тризолдың негізгі компоненті - фенол.Фенолдың негізгі қызметі - жасушаларды лизистік және жасушалардағы ақуыздар мен нуклеин қышқылының заттарын босату.Фенол ақуыздарды тиімді денатурациялай алса да, ол RNase белсенділігін толығымен тежей алмайды.Сондықтан эндогендік және экзогендік РНазды тежеу ​​үшін ТРИзолға 8-гидроксихинолин, гуанидин-изотиоцианат, β-меркаптоэтанол және т.б.
Жасушалық РНҚ-ны экстракциялау кезінде Тризол жасушаларды жылдам лизиске түсіріп, жасушалардан бөлінетін нуклеазаны тежей алады, ал қалдық Тризол A260/A230 арақатынасын айтарлықтай төмендетеді.
Өңдеу әдісі: Центрифугалау кезінде тризолдағы фенолдың 4° және бөлме температурасында су фазасында оңай еритінін ескеру қажет.

4. Этанол қалдығы
Этанол соңғы процесте ДНҚ-мен байланысуы мүмкін тұз иондарын еріту кезінде ДНҚ-ны тұндыру үшін қолданылады.Ең жоғары жұтылу толқын ұзындығысіңіру шыңыэтанол да 230-240 нм, олсонымен қатар A260/A230 арақатынасын азайтады.
Этанол қалдығын болдырмау әдісін соңғы элюция кезінде, үрлеу кезінде екі рет қайталауға боладысорғышэлюцияға арналған буферді қоспас бұрын этанолдың толық булануына мүмкіндік беру үшін екі минут бойы.
Дегенмен, қатынас РНҚ сапасының бағалау көрсеткіші ғана екенін білу керек.Егер жоғарыда аталған операциялар қатаң түрде реттелсе, арақатынас пен стандартты диапазон арасындағы ауытқу төменгі ағындағы тәжірибелерге үлкен әсер етпейді.
Қосымша тауарлар:
Жануарлардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы
Өсімдіктердің жалпы РНҚ оқшаулау жинағы
Жасушаның жалпы РНҚ оқшаулау жинағы
Өсімдіктердің жалпы РНҚ оқшаулау жинағы Plus