Зертханалық сынақ үлгілерді жинаудан басталады, ал сынама жинауға назар аудару оңай.Үлгіні алу үшін ең маңыздысы дұрыс үлгі түрін таңдау, сәйкес сынама алу құралдарын пайдалану және ақылға қонымды тасымалдау мен өңдеуді жүзеге асыру болып табылады.

I. Үлгі түрі

Жалпы үлгі түрлері келесідей:

Сынамаларды іріктеу әдісі ауылшаруашылық сауда (базар) нарығында жаңа коронавирустың экологиялық мониторингінің техникалық сипаттамаларына сілтеме жасай алады»:

1. Тәжірибеші мамандардың жұлдыру жағындыларынан, қолдарынан, киімдерінен және басқа заттарынан жағынды үлгілері: вирус сынамаларын алу түтігінде вирусты сақтайтын ерітіндіні қолдану және сынама алу мақта тампондарына толығымен инфильтрациялау қажет.Жер беті) бірнеше рет жағылады және 3 реттен артық шаяды.Бұл ретте сынама алынған объектінің бетінде көп нүктелі үлестірілген сынама алуды орындау қажет.

2. Тағам бетінің жағынды үлгілері: тағам үлгілерін тікелей жинау мүмкін емес.Жиналатын тағам мұқият бөлініп, жағынды үлгілерін жинамас бұрын таза сынама алу қапшығында сақталуы керек.Сынама алынған мақта тампонын толығымен жібіткеннен кейін, жиналатын тағам үлгісінің бетін 3 реттен көп қайталап жағып, шаю үшін вирус сынамаларын алу түтігінде вирусты сақтайтын ерітіндіні пайдалану қажет.Бұл ретте сынама бетінде көп нүктелі бөлінген сынама алуды орындау қажет.

3. Ағынды сулардың үлгілері: Дренаж жүйесінің нарықтағы таралуына сәйкес ішкі құбыр желісінің жиналуына, су ағынының бағытының төменгі ағынына немесе қалалық құбыр желісімен қосылуға назар аудара отырып, 2-3 ағынды суларды іріктеу орнын таңдаңыз.Тампон үлгісін жинау үшін оны ағынды суды адсорбциялау үшін сынама мақта тампонымен ағынды суға батырыңыз және сынама алу түтігінде 3 реттен артық шайыңыз.Ағынды су үлгілерін жинау үшін 30-500 мл ағынды су үлгілерін жинау үшін полиэтиленді пластик бөтелкелерді пайдаланыңыз;көлемі 500 мл-ден асатын ағынды суларды жинау үшін полиэтиленнен жасалған пластик шелектерді немесе жердегі су үлгісін арнайы байыту жабдығын пайдалануға болады.Бұл ретте ағынды сулардың сынамаларын алу орны үшін көп нүктелі үлестірілген сынама алуды жүргізу қажет.

4. Жануарлардың үлгілері: Тірі жануарлар үшін сынама алу жағындыларын дене беті жағындыларын, орофарингеальды жағындыларды және аналь жағындыларын жинау үшін пайдалануға болады, сондай-ақ нәжіс немесе секреция үлгілерін жинауға және сәйкесінше есепке алу парағына жазуға болады.Тері сыпырылған жануарлар үлгілері үшін және т.б., олардың дене беті мен дене қуысының жағынды үлгілерін жинау үшін мақта тампондарын пайдаланыңыз.Сынама алу мақта тампонына толығымен инфильтрациялау үшін вирус сынамаларын алу түтігінде вирусты сақтау ерітіндісін пайдалану қажет, содан кейін жиналатын тағам үлгісінің бетін жағуды қайталаңыз.Шабу 3 еседен астам.Бұл ретте сынама бетінде көп нүктелі бөлінген сынама алуды орындау қажет.

5. Басқа құрылғылар: торлар немесе балық резервуарлары сияқты жануарларды тасымалдауға және өсіруге арналған контейнерлер.Біріншіден, контейнерде сақталатын және өсірілетін жануарлардың нақты түрлерін қадағалаңыз немесе түсініңіз және контейнердің ішкі қабырғасына жағынды үлгілерін немесе мазмұнының сұйық үлгілерін жинаңыз.

6.Аэрозоль үлгілерін адамдар көп жиналатын жерлерде, нашар желдетілетін жергілікті сауда орындарында, кеңселерде және демалыс бөлмелерінде жинаңыз.

II. Сынама алу құралдары
1. Қан алу түтігі
Кейінірек нуклеин қышқылын сынау және антикоагулянттық үлгілерді жасау қажет болса, қан жинау үшін құрамында ЭДТА антикоагулянты бар вакуумды қан тамырын пайдалану ұсынылады;сарысу үлгілері үшін антикоагулянтсыз вакуумды қан тамырларын пайдалану ұсынылады.

2. Сынама алу тампоны

Кальций алгинаты жағындыларының немесе ағаш тіректері бар тампондардың орнына полипропиленді тампондарды пайдалану ұсынылады, өйткені олардың құрамында белгілі бір вирустарды белсендірмейтін және ПТР сынамасын тежейтін заттар болуы мүмкін.Мақта бастары бар тампондарды қолдануға болмайды, өйткені мақта талшықтары ақуыздың күшті адсорбциясына ие және одан кейінгі консервілеу ерітіндісіне оңай элюцияланбайды.

«Жаңа коронавирустық нуклеин қышқылдарын 10-да 1 аралас жинауға және анықтауға арналған техникалық сипаттамаларда» «сынама алу жағындысы полиэфирден, нейлоннан және басқа мақта емес және кальцийлі емес альгинатты материалдардан жасалуы керек, ал тұтқасы ағаш емес материалдан жасалуы керек» деп нақты көрсетілген.Сыну нүктесі жағынды басының жоғарғы жағынан шамамен 3 см қашықтықта, оны бұзу оңай».

Америка Құрама Штаттарындағы CDC сонымен қатар «Тек пластикалық немесе сым біліктері бар синтетикалық талшықты тампондарды пайдаланыңыз.Кальций алгинаты жағындыларын немесе ағаш біліктерімен тампондарды қолданбаңыз,өйткені олардың құрамында кейбір вирустарды белсендірмейтін және ПТР тестін тежейтін заттар болуы мүмкін.

Қазіргі уақытта пластикалық таяқшамен біріктірілген бір рет қолданылатын стерильді нейлоннан жасалған тампон кеңінен қолданылады.Топтама тампонында суды жақсы сіңіру және босату жылдамдығы бар.Әртүрлі сынама алу орындарына сәйкес, жағынды басының да өлшемдері мен талшықтары әртүрлі.қалыңдығы.»

3. Үлгіні тасымалдауды сақтау ерітіндісі

Вирусты инактивациялауды сақтау ерітіндісі: гуанидин тұзының концентрациясының тиісті мөлшері және вирус лизисінің әртүрлі компоненттері нуклеин қышқылын босату, RNase және DNase инактивациялау және кейінгі qPCR анықтау үшін пайдаланылуы мүмкін нуклеин қышқылының тұтастығын қамтамасыз ету үшін вирусты тікелей лизисі мүмкін.Оны вирусты өсіру және оқшаулау үшін қолдануға болмайды.

Вирусты тасымалдау және сақтау ерітіндісі: құрамында вирустың белсенділігін сақтай алатын тұздар, аминқышқылдары, витаминдер, глюкоза және вирустың тіршілігіне қажетті ақуыз бар.Оны болашақта нуклеин қышқылын алу және вирусты анықтау үшін қолдануға болады, сондай-ақ вирусты өсіру және бөлу үшін де қолданылуы мүмкін.

4. Үлгіні сақтау түтігі және үлгі қалтасы

Үлгіні сақтайтын түтік нуклеин қышқылын сіңірмейтін бұрандалы қақпағы бар стерильді пластикалық түтік болуы керек.Үлгінің ағып кетуін және ластануын болдырмау үшін әрбір үлгі түтігі үлгі қалтасымен жабылуы керек.

III.Үлгідегі кедергі жасайтын заттар

ПТР тәжірибелеріндегі интерференциялық заттар

1. эндогендік интерференция

Дене үлгісінде бар заттар басқа заттарды анықтауға кедергі келтіруі мүмкін.

Қан:гем (>1мг/мл), гемин (>0,1нг/мкл), триглицеридтер, IgG және т.б.;

Зәр:Мочевина (20 мМ);

Нәжіс:өсімдік полисахаридтері, холаты;

Тін:протеаза, коллаген;

Сүт: протеаза, кальций ионы;

Есірткілер: антибиотиктер, вирусқа қарсы препараттар, гормондар және т.б.

басқа.

2. экзогендік интерференция

Ол in vitro жағдайында басқа заттарды анықтауға кедергі келтіруі мүмкін заттардан келеді.Үлгілерді жинау және өңдеу кезінде жанасуға болатын үлгі қоспалары мен заттар:

Сынақ құралдары: сарысуды бөлуге арналған гель, сынама алуға арналған контейнер және резеңке тығын, катетер, катетерді жуу сұйықтығы, қолғап ұнтағы және т.б.

Антикоагулянт: гепарин (>0,1 U/мл), ЭДТА (>0,5 мМ) және т.б.;

Органикалық еріткіштер: изопропанол (>0,1 ХБ/мл), бетаин, диметилсульфоксид, формамид, глицерин, ПЭГ және т.б.;

Дезинфекциялау құралдары: спирттер (этанол>1%), альдегидтер, фенолдар (фенол>0,2%), пероксидтер, күшті қышқылдар (HCL), күшті сілтілер (NaOH) және т.б.;

Жуғыш зат:SDS (>0,005%);

Топырақ: гумус

Бояғыш: Индиго

басқа.

Нақты сыртқы сынама алу жағдайында, мысалы, қоршаған орта үлгілерін жинау, үлгілерде әртүрлі кедергі жасайтын заттар болуы мүмкін және әр жерде кедергі жасайтын заттардың құрамы әртүрлі, бұл жергілікті жағдайларға сәйкес ПТР кедергі эксперименттерін жүргізуді талап етеді.

IV.Үлгіні сақтау және тасымалдау шарттары

Жаңадан жиналған клиникалық үлгілерді 2°C - 8°C температурада жинағаннан кейін 2-4 сағат ішінде зертханаға жіберу керек.4℃ температурада 24 сағат ішінде сақтаңыз.Вирусты оқшаулау және нуклеин қышқылын анықтау үшін пайдаланылатын үлгілерді мүмкіндігінше тезірек сынау керек.24 сағат ішінде сынауға болатын үлгілерді 4°C температурада сақтауға болады;24 сағат ішінде анықталмайтын үлгілерді -70°C немесе одан төмен температурада сақтау керек (егер олай болмаса - 70°C тоңазытқышта -20°C температурада сақтаңыз).

Түйіндеме:Үлгілерді стандартталған жинау, тасымалдау және сақтау кейінгі сынақтар үшін өте маңызды.Көптеген зертханалық зерттеулердің жалған теріс көрсеткіштері вирустық нуклеин қышқылының ыдырауына әкелетін үлгілерді дұрыс жинамау, тасымалдау және сақтаудан туындайды.Дегенмен, көптеген зертханалар сынама алудың маңыздылығын әлі де елемейді.Бұл мақала сынама алуға барлығының назарын оятып, ғылыми және негізді таңдау жасай алады деп үміттенемін!

Қатысты өнім:

SARS-CoV-2 нұсқалы нуклеин қышқылын анықтау жинағы (I) (Мультиплексті ПТР флуоресцентті зонд әдісі) - Бразилия, Оңтүстік Африка және Ұлыбританиядан мутанттарды анықтауға арналған