Сіз қаншалықты білесіз

туралы Ннуклеин қышқылын алу

Тазартылған нуклеин қышқылының басы мен соңы

Басында бәрі қиын, тазартылған нуклеин қышқылы ең көп

Кейінгі эксперименттер үшін молекулалық тәжірибелерді бастау

Сәттілік немесе сәтсіздік шешуші әсер етеді.

Іздік/ультра ізді УК-спектрофотометрді көптеген ғылыми зерттеушілер жақсы көреді, себебі ол нуклеин қышқылының концентрациясын және ақуыз бен тұз иондарының қалдықтарын қарапайым, жылдам және үнемді түрде анықтай алады.

Барлығымыз білетіндей, A260 - нуклеин қышқылының сіңіру қабілетінің OD мәнін білдіреді, A280 - ақуыз концентрациясының сіңірілуінің OD мәнін, A230 - тұз иондарының концентрациясының сіңірілуінің OD мәнін білдіреді, сондықтан A260 - нуклеин қышқылының концентрациясын түрлендіре алады, A260/280 - ақуыз қалдығын, A260/230 - тұз ионының қалдығын білдіреді, бірақ бұл тек зерттеу нәтижелеріне негізделген үлкен сан және өлшеу нәтижесі.дәстүрліДНҚ мен РНҚ тазалығын түсіндіре алатынына сенубелгілі бір дәрежеде.Бұл нуклеин қышқылының шығымдылығы мен тазалығын анықтаудың жалғыз стандарты емес, ол тек анықтама ретінде пайдаланылады және «алтын стандарт» емес.

Thermo Fisher ND-2000 нұсқаулығы сынақ нәтижелерінің сенімділігіне баса назар аударады

Себебі, микро/ультрамикро УК-спектрофотометрді қолдану арқылы алынған нәтижелер тек бүйірден нуклеин қышқылының шығымдылығы мен тазалығын көрсетеді және көптеген әсер ететін факторлар бар (оптикалық жол, үлгі көлемі, үлгі концентрациясы, рН мәні, сіңіру қабілетін өлшеуге әсер ететін басқа иондар және т.б.), өлшенген OD мәні міндетті түрде дәл емес.Сонымен қатар, сіңіру мәнін анықтайтын материалдың спецификасының болмауына байланысты бір тізбекті ДНҚ, екі тізбекті ДНҚ, РНҚ, dNTP және кейбір ақуыздардың барлығында 260 нм толқын ұзындығында абсорбция шыңдары болады және тек A260 арқылы анықталған концентрация нақты ДНҚ немесе РНҚ болуы міндетті емес.Шоғырлану, оның тұтастығы мен деградациясын бағалау мүмкін емес.

Сонымен, тазартылған нуклеин қышқылының сапасын қалай бағалауға болады?Анықтау үшін микро/ультрамикро УК-спектрофотометрді пайдаланудан басқа, нуклеин қышқылының тазалығы мен тұтастығын визуалды түрде көрсету және белгілі бір дәрежеде концентрацияны көрсету үшін агарозды гель электрофорезі сияқты әдістер қажет.Осылайша, әртүрлі әдістердің анықтау нәтижелерінен алынған нуклеин қышқылының шығымы мен тазалығы сенімді.

Эксперименттік диаграмманы салыстыру

H1299 жасушаларының геномдық ДНҚ-сы A компаниясының ДНҚ экстракция жинақтары арқылы экстракцияланды және қоспаның айтарлықтай ластануы байқалды, нәтижесінде жоғары OD мәндері пайда болды.

(OD өлшеу мәні және сәйкес электроферограмма)

Бағалау көрсеткіші

Нуклеин қышқылының шығымы мен сапасын сынаудың «алтын стандарты» бар ма?

Біздің білуімізше, қарапайым, жылдам және арзан әдіс жоқ.Спектрофотометр, гельдік электрофорез немесе масс-спектрометрия болсын, олардың барлығы ерітіндідегі нуклеин қышқылының концентрациясы мен тазалығын әртүрлі аспектілерден көрсетеді және оларды бір-біріне сілтеме жасау арқылы бағалау керек.

Ең жақсы бағалау көрсеткіші әрқашанкейінгі эксперименттік қолдану.Ол кері транскрипцияның және ПТР күшейтудің тиімділігіне әсер етпейді.Сенімді күшейту өнімдерін және Ct мәндерін алу және секвенирлеу арқылы толық тізбекті алу нуклеин қышқылының сәтті экстракциясы болып табылады.

Қорытындылай келе, тек қатынас теориясының көзқарасы «жақсы экстракция параметрлері ретінде төменгі ағынның жақсы эксперименттік нәтижелерін пайдалану» көзқарасымен дауласуы керек!

Жоғары ДНҚ/РНҚ тазалығын алу үшін ұсынылған Foregene ДНҚ РНҚ экстракция жинақтары:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/