Эксперимент персоналының мінез-құлқын стандарттау үшін ПТР экспериментінің SOP құру.
Экспериментатор операциялық процедураларды қатаң сақтайды және адам факторларынан туындауы мүмкін ПТР ластануын барынша азайтады немесе ластанудың пайда болуын болдырмайды.Сонымен қатар, экспериментатордың тиісті кәсіби білімі мен дағдылары болуы керек, соның ішінде тиісті жабдықты пайдалану, бүкіл жұмыс процесін нақтылау, ластанудан тазарту әдістерін және зертханалық сапаны бақылау әдістерін меңгеру, сынақ нәтижелерін дұрыс түсіндіре білу.
Стандартты ПТР зертханасын құру.
ПТР зертханасы негізінен төрт аймаққа бөлінеді, атап айтқанда реагент дайындау аймағы, үлгіні өңдеу аймағы, күшейту аймағы және күшейту өнімін талдау аймағы.Алғашқы екі аймақ - күшейтуге дейінгі аймақтар, ал соңғы екі аймақ - күшейтуден кейінгі аймақтар.Күшейтуге дейінгі аймақ пен күшейтуден кейінгі аймақты қатаң түрде бөлу керек.Эксперименттік материалдар, реагенттер, жазу қағазы, қаламдар, тазалау материалдары және т.б. тек күшейту алдындағы аймақтан күшейтуден кейінгі аймаққа, яғни реагент дайындау аймағынан → үлгіні өңдеу аймағынан → күшейту аймағынан → күшейту өнімін талдау аймағынан ағып кетуі мүмкін және кері ағып кетпеуі керек.Зертханадағы ауа ағыны да күшейтуге дейінгі аймақтан күшейтуден кейінгі аймаққа ағуы керек, кері ағып кетпеуі керек.Идеал ПТР зертханасының дизайны төменде көрсетілген:
A суреті: Буферлік бөлмеде теріс қысыммен тамаша ПТР зертханасын орнату режимі
B суреті: Буферлік бөлмеде оң қысыммен тамаша ПТР зертханасын орнату режимі
А және В суретінде келтірілген ПТР зертханасын орнату диаграммалары ең жақсы орнату режимі болуы керек және шарттары бар зертхана жобалау үшін осы режимге сілтеме жасай алады.Қарапайым зертханалар үшін ПТР күшейту аймағы мен өнімді талдау аймағын бөлуге болады, ал үлгіні дайындау аймағында және ПТР күшейту аймағында қақпақтың ашылуын мүмкіндігінше азайту керек.Есіңізде болсын: Өнімді талдау аймағындағы өнімдер мен эксперименттік жабдықтарды үлгі дайындау аймағына және ПТР күшейту аймағына алып шығуға қатаң тыйым салынады.
Егер зертхана тек ПТР анықтау және сәйкестендіруді орындаса, әдеттегі ПТР орнына флуоресцентті сандық ПТР қолдану ұсынылады.
Флуоресценцияның сандық ПТР анықтау нәтижелерін флуоресценция сигналдары арқылы жинауға және талдауға болады, сондықтан реакциядан кейін электрофорез үшін қақпақты ашудың қажеті жоқ, бұл аэрозоль түзу үшін реакция өнімдерінің ағуынан туындаған ПТР өнімінің ластануын болдырмайды.Гель электрофорезінің жүктеу сатысында қақпақ саңылауларының санын көбейтсеңіз, аэрозольмен ластану пайда болуы мүмкін.Сандық ПТР қолдануды ілгерілету және сапалы ПТР-ны біртіндеп ауыстыру ұсынылады.
ПТР реакциясы үшін UNG анти-ПТР өнімді ластану жүйесі қолданылады.
Жүйе dTTP орнына dUTP пайдаланады.ПТР реакциясынан кейін барлық ПТР өнімдері (ДНҚ фрагменттері) dUTP-мен біріктіріледі;ПТР реакциясының келесі раундында жүйеге қосылған UNG ферменті ПТР алдында 5 минут бойы 37°C температурада инкубацияланады, ол dUTP бар барлық ДНҚ фрагменттерін арнайы бұза алады, содан кейін ПТР реакциясын жүргізеді.Бұл ПТР өнімдерінен туындаған аэрозольді ластануды толығымен жоя алады.Әсер төмендегі суретте көрсетілген:
Ескертпе: Тікелей ПТР сериялары үшін сіз Foregene компаниясының ПТР өнімінің ластануына қарсы жүйесінің сериялық өнімдерін таңдай аласыз.Ұсыну
Кең ауқымды генотиптік сынауды жүргізетін зертханалар үшін ақылға қонымды зертханалардың құрылысына қосымша реагенттерді сынау үшін UNG анти-ПТР өнімінің ластану жүйесін пайдалану қатаң ұсынылады.
Ескерту: Бұл жүйені пайдалану бұрыннан туындаған ПТР өнімінің ластануын жоя алмайды.Сондықтан, сәйкес сынақтың басында UNG жүйесін пайдалану керек, ал ПТР өнімдерінің ластануын болдырмау үшін UNG жүйесін ПТР күшейту үшін пайдалану керек Жалған оң.
Кең ауқымды сынақтарды жүргізген кезде Foregene Direct PCR-UNG жүйесін пайдалану ұсынылады, мысалы:
Өсімдік жапырағының тікелей ПТР жинағы-UNG；
Өсімдік тұқымының тікелей ПТР жинағы-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Бұл Foregene жинақтарының сериясыПТР анықтауды жылдам және ауқымды түрде орындап қана қоймай, сонымен қатар ПТР өнімінің ластануын тиімді алдын алу және бақылау.
Жіберу уақыты: 19 наурыз 2021 ж
