1: Эксперименттік жабдықтарды уақытында ауыстырыңыз

Теріс басқаруды (NTC) орнатыңыз және оны бірнеше рет қайталаңыз.Зертханада ПТР өнімінің ластануы анықталғаннан кейін барлық тәжірибелік құралдарды уақытында ауыстырыңыз.Мысалы: праймерлерді қайта сұйылту және дайындау, тамшуыр ұшын, EP түтігін, ddH2O және т.б. қайта зарарсыздандыру, жаңа тамшуырмен ауыстыру және ПТР эксперименттерін орындау үшін басқа зертханаларды уақытша қарызға алу.Ластанған зертхана экспериментті жалғастырмас бұрын ПТР өнімінің ластануы жойылғанша желдетіліп, ультракүлгін сәулелермен сәулеленуі керек.

2: УК экспозиция уақытын ұзарту

Айта кету керек, ДНҚ ластануын жою үшін әдеттегі ультракүлгін сәулеленуді әдеттегіден 2 сағатқа ұзарту керек.Осыған қарамастан, УК-сәулеленудің ДНҚ ластануының шағын фрагменттерін (200 бит төмен) жоюға әсері әлі де жақсы емес.

Ультракүлгін толқын ұзындығы (нм) әдетте 254/300 нм және 30 минут сәулеленуге жеткілікті.ПТР өнімдерінің қалдық ластануын жою үшін УК таңдау кезінде ПТР өнімінің ұзындығын және өнім реттілігіндегі негіздердің таралуын ескеру қажет екенін атап өткен жөн.Ультракүлгін сәулелену 500 бит жоғары ұзын фрагменттерде ғана тиімді, ал қысқа фрагменттерге аз әсер етеді.

Ультракүлгін сәулелену кезінде ПТР өніміндегі пиримидиндік негіздер димерлерді түзеді.Бұл димерлер ұзартуды тоқтата алады, бірақ ДНҚ тізбегіндегі пиримидиндердің барлығы димерлерді құра алмайды, ал ультракүлгін сәулелену димерлерді де бұзуы мүмкін..Димердің пайда болу дәрежесі ультракүлгін толқын ұзындығына, пиримидин димерінің түріне және димер учаскесіне іргелес нуклеотидтердің тізбегіне байланысты.Сондықтан, ПТР күшейтілген фрагменттері кішкентай болса, UNG анти-ПТР өнімінің ластану жүйесін пайдалану ұсынылады.

3: Жиі қолданылатын ДНҚ ластануын тазартқыштар

Тамшуырларды қосқанда аэрозольдер оңай түзіледі, оны болдырмау қиын және ол тез тұнып қалады.Сондықтан ДНҚ ластануының таралуына жол бермеу үшін арнайы ДНҚ ластануын тазартқыштарды жиі пайдалану жақсы таңдау екені сөзсіз.

4: UNG ластанудан қорғау жүйесін пайдаланыңыз

ПТР өнімінің ластануы жойылғаннан кейін сынақ зертханасы ПТР өнімінің ластануын болдырмау үшін UNG анти-ПТР өнімінің ластану жүйесін пайдалана алады.Жалпы зертханаларда қарапайым тәжірибелік бөлімдерді орындауға, ПТР өнімінің аймағын басқа аймақтардан қатаң бөлуге, белгілі бір зертханалық ережелер мен ережелерді орнатуға және ПТР өнімінің ластануының алдын алу үшін тиісті оқытуды өткізуге болады.

Ұсыныстар: Ақылға қонымды ПТР зертханасын құру, жақсы ПТР ортасын сақтау, стандартты ПТР операциялық процедураларын тұжырымдау және экспериментаторлардың қатаң операциялық хабардарлығын арттыру ПТР эксперименттерінің ластануын болдырмау немесе азайтудың кілті болып табылады.