Мәселені талдау нұсқаулығы

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Төмен өнімділік немесе ДНҚ жоқ

Әдетте геномдық ДНҚ шығымына әсер ететін көптеген факторлар бар, соның ішінде үлгінің көзі, үлгінің жасы, үлгіні сақтау шарттары және операция.

Экстракция кезінде геномдық ДНҚ-ны алу мүмкін болмады

1. Тін үлгілері дұрыс сақталмаған немесе тым ұзақ сақталады, нәтижесінде геномдық ДНҚ бұзылады.

Ұсыныс: Тін үлгілерін сұйық азотта немесе -20 ішінде сақтаңыз°C;геномдық ДНҚ экстракциясы үшін жаңадан жиналған үлгілерді қолдануға тырысыңыз.

2. Үлгі мөлшерінің тым аз болуы сәйкес геномдық ДНҚ-ның алынбауына әкелуі мүмкін.

Ұсыныс: Ұзақ уақыт бойы сақталған немесе ауыр геномдық ДНҚ деградациясына ұшыраған тін үлгілері үшін айтарлықтай геномдық ДНҚ алу үшін тін үлгілерінің мөлшерін сәйкесінше арттыруға болады.Үлгінің мөлшерін ДНҚ қажеттіліктеріне сәйкес анықтауға болады, бірақ жаңа үлгі 100 мг, ал құрғақ үлгі 30 мг аспауы керек.

3. Үлгі сұйық азотпен ұнтақталған немесе сұйық азоттан кейін тым ұзақ уақытқа орналастырылмаған.

Ұсыныс: ДНҚ экстракциясы кезінде жасуша қабырғасын бұзу үшін үлгіні сұйық азотпен толығымен ұнтақтау қажет;ұнтақтаудан кейін үлгі ұнтағын 65 градусқа алдын ала қыздырылған PL1-ге жіберіңіз°C мүмкіндігінше тезірек (ұнтақ ерігеннен кейін геномдық ДНҚ тез бұзыла бастайды) .

4. Foregene Protease дұрыс сақталмауы белсенділіктің төмендеуіне немесе инактивациялануына әкеледі.

Ұсыныс: Foregene Protease сақтау шарттарын растаңыз немесе оны ферментативті гидролизге арналған жаңа Foregene Protease-мен ауыстырыңыз.

5. Жинақ дұрыс сақталмаған немесе тым ұзақ сақталған, бұл жинақтағы кейбір компоненттердің істен шығуына әкеледі.

Ұсыныс: Қатысты операциялар үшін жаңа өсімдік геномдық ДНҚ экстракция жинағын сатып алыңыз.

6. Жинақты дұрыс пайдаланбау.

Ұсыныс: Өсімдік геномдық ДНҚ-сын алу және тазарту үшін үлгілерге арналған Өсімдік ДНҚ оқшаулау жинағын сатып алыңыз.

7. А қоспай WB буферісусыз этанол.

Ұсыныс: WB буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосқаныңызға көз жеткізіңіз.

8. Элюент кремнеземдік мембранаға дұрыс тамызылмаған.

Ұсыныс: 65 градусқа алдын ала қыздырылған элюент қосыңыз℃силикагельді мембрананың ортасына тамшылатып, элюция тиімділігін арттыру үшін оны бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз.

Төмен өнімді геномдық ДНҚ алу үшін экстракция

1. Үлгі дұрыс сақталмаған немесе тым ұзақ сақталған, нәтижесінде геномдық ДНҚ ыдырауы.

Ұсыныс: ұлпа үлгілерін -20 температурада сақтаңыз℃;геномдық ДНҚ экстракциясы үшін жаңадан жиналған тін үлгілерін қолдануға тырысыңыз.

2. Егер тін үлгілерінің мөлшері тым аз болса, алынған геномдық ДНҚ аз болады.

Ұсыныс: Кейбір өсімдіктер үлгілері суға бай, мысалы, балдырлар және т.б. сияқты су өсімдіктері, дозаны тиісті түрде арттыруға немесе операциядан сәл бұрын суды сусыздандыруға болады.

3. Үлгілер сұйық азотпен мұқият ұнтақталған жоқ немесе ұнтақтағаннан кейін бөлме температурасында тым ұзақ қалдырылды.

Ұсыныс: сұйық азотты ұнтақтау жеткілікті болуы керек, ал үлгінің жасуша қабырғасы мүмкіндігінше сынған болуы керек;ұнтақтаудан кейін бірден үлгі ұнтағын 65-ке ауыстыру керек℃келесі қадам үшін алдын ала қыздырылған буфер PL1.

4. Дұрыс жинақты пайдаланбау.

Ұсыныс: Өсімдік геномдық ДНҚ-сын алу және тазарту үшін арнайы өсімдік ДНҚ оқшаулау жинағын пайдаланыңыз.

5. Foregene Protease дұрыс сақталмауы белсенділіктің төмендеуіне немесе инактивациялануына әкеледі.

Ұсыныс: Foregene Protease сақтау шарттарын растаңыз немесе оны ферментативті гидролизге арналған жаңа Foregene Protease-мен ауыстырыңыз.

6. Элюент мәселесі

Ұсыныс: Элюция үшін Buffer EB пайдаланыңыз;ddH пайдалансаңыз₂O немесе басқа элюенттер, элюенттің рН 7,0-8,5 арасында екеніне көз жеткізіңіз.

7. Элюент дұрыс тамызылмаған

Ұсыныс: Элюцияның тиімділігін арттыру үшін кремнеземдік мембрананың ортасына элюция тамшысын қосып, оны бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз.

8. Элюент көлемі тым аз

Ұсыныс: геномдық ДНҚ элюциясы үшін элюентті нұсқауларға сәйкес пайдаланыңыз, кемінде 100мкл.

Төмен тазалығы бар экстракцияланған геномдық ДНҚ

Геномдық ДНҚ-ның төмен тазалығы төменгі ағындағы эксперименттердің сәтсіздігіне немесе нашар әсеріне әкеледі, мысалы: ферментті кесу мүмкін емес және мақсатты ген фрагментін ПТР арқылы алу мүмкін емес.

1. Әртүрлі ақуыздың ластануы, РНҚ-ның ластануы.

Талдау: буфер PW колонканы жуу үшін пайдаланылмаған;Бағанды ​​дұрыс центрифугалау жылдамдығымен жуу үшін PW буфері пайдаланылмады.

Ұсыныс: үстіңгі затты колонка арқылы өткізген кезде үстіңгі затта жауын-шашынның болмауын қамтамасыз етуге тырысыңыз;нұсқауларға сәйкес тазарту бағанасын PW буферімен жууды ұмытпаңыз және бұл қадамды өткізіп жіберуге болмайды.

2. Қоспалардың иондарымен ластануы.

Талдау: Buffer WB жуу бағаны қабылданбады немесе тек бір рет жуылды, нәтижесінде қалдық иондық ластану пайда болды.

Ұсыныс: Қалдық иондарды мүмкіндігінше кетіру үшін нұсқауларға сәйкес WB буферімен екі рет жууды ұмытпаңыз.

3. RNase ластануы.

Талдау: буферге экзогендік RNase қосылады;Buffer PW ішіндегі дұрыс жуу операциясы қалдық RNase пайда болады және in vitro транскрипциясы сияқты төменгі ағындағы РНҚ тәжірибелік операцияларына әсер етеді.

Ұсыныс: Foregene сериясының нуклеин қышқылын экстракциялау жинақтары РНҚ-ны қосымша RNaseсіз жоя алады және Өсімдік ДНҚ оқшаулау жинағындағы барлық реагенттерге RNase қажет емес;нұсқауларға сәйкес тазарту бағанасын PW буферімен жууды ұмытпаңыз және бұл қадамды өткізіп жіберуге болмайды.

4. Этанол қалдықтары.

Талдау: тазарту бағанасын WB буферімен жуғаннан кейін бос түтікті центрифугалау орындалмады.

Ұсыныс: бос түтікті дұрыс центрифугалау нұсқауларын орындаңыз.

Нұсқаулық:

Өсімдік ДНҚ оқшаулау жинағы Нұсқаулық