Қорғасын

Ұзақ кодталмаған РНҚ, lncRNA — ұзындығы 200 нуклеотидтен асатын, әдетте 200-100000 нт аралығындағы кодталмаған РНҚ.lncRNA эпигенетикалық, транскрипциялық және посттранскрипциялық деңгейлерде геннің экспрессиясын реттейді және Х-хромосоманың дыбысын өшіруге, геномды импринтингке және хроматинді модификациялауға, транскрипцияны белсендіруге, транскрипцияның интерференциясына, ядролық тасымалдауға, жасуша циклін реттеуге, жасушалардың дифференциациясын реттеуге және басқа да көптеген әсерлермен тығыз байланысты әсерлерді реттеуге қатысады. адам ауруларының пайда болуына, дамуына және алдын алуға бағытталған және қазіргі уақытта биомедицина саласындағы ыстық нүктелердің бірі болып табылады.

01  LncRNA типтері мен сипаттамалары

lncRNA жоғарыдағы суретте көрсетілгендей түзілу көздеріне қарай көптеген түрлерге бөлінеді.Келесі сипаттамаларға ие:

1. lncRNAs әдетте ұзағырақ, динамикалық экспрессиямен және дифференциация кезінде әртүрлі сплайсинг әдістерімен
2. Кодтау гендерімен салыстырғанда, lncRNA әдетте төмен экспрессия деңгейіне ие
3. lncRNA-лардың көпшілігінде тіндердің дифференциациясы мен дамуы процесінде айқын уақыттық және кеңістіктік экспрессиялық спецификалық болады.
4. Ісіктерге және басқа ауруларға тән өрнектер бар
5. lncRNA-ның жасуша асты орналасуы әртүрлі
6. Реттілік сақталуда төмен, бірақ функция белгілі дәрежеде сақталу және т.б.

02 LncRNA кері транскрипциясы туралы жиі қойылатын сұрақтар

Жасушалардағы lncRNA аз мөлшерде, ұзын ұзындықта және жоғары деңгейлі құрылым болғандықтан, мұндай РНҚ көбінесе діңгекті ілмектер немесе шаш қыстырғыштары сияқты күрделі құрылымдарға ие, ал RT-qPCR сәтсіз кері транскрипция немесе төмен тиімділік мәселелеріне бейім.

03 LncRNA кері транскрипция ерітіндісі

Орталық ережеде РНҚ вирустарының РНҚ-ны шаблон ретінде пайдаланып ДНҚ синтездеу үшін өздерінің кері транскриптазасын қолдану процесі кері транскрипция деп аталады.CDNA үлгісін in vitro синтездеу үшін РНҚ вирусының кері транскриптазасын қолдану процесі кері транскрипция деп аталады.Кері транскрипция жүйесіне кіретін негізгі элементтер: РНҚ шаблон, кері транскриптаза, праймерлер және басқа компоненттер.

1.РНҚ үлгісі

РНҚ шаблонының кері транскрипцияға әсері оның құрылымында, тазалығы мен тұтастығында көрінеді.Алынған РНҚ тазалығы мен тұтастығы неғұрлым жоғары болса, кері транскрипцияның тиімділігі соғұрлым жоғары және кейінгі сандық нәтижелер дәлірек болады.Жиі қолданылатын РНҚ экстракциялық реагенттермен тазартылған РНҚ құрамында көбінесе кері транскриптазаға күшті ингибиторлық әсер ететін спирт пен гуанидин тұздарының қалдықтары болады.

2. Кері транскриптаза

Кері транскриптаза бүкіл кері транскрипция жүйесінде негізгі әсерге ие.Көптеген зертханаларда қолданылатын кері транскриптаза үшін қолайлы температура әдетте 42°C.Шын мәнінде, жоғары деңгейлі РНҚ құрылымының ашылуы жоғары температураны қажет етеді, ал кері транскриптазаға қойылатын талаптар жоғарырақ.

3.Праймер

Кері транскрипциялық праймерлерге генге тән праймерлер, кездейсоқ праймерлер және Oligo dT праймерлер жатады.Көптеген lncRNA-да полиА құйрықтары жоқ және кездейсоқ праймерлерді Oligo dT-мен дұрыс сәйкестендіру маңызды.

4. Басқа компоненттер

РНҚ-ның ыдырауы өте оңай екендігін ескере отырып, кері транскрипция жүйесіне компоненттерді енгізуді азайтуға болады, бұл RNase енуін тиімді болдырмайды және кері транскрипцияның бірқалыпты прогресін қамтамасыз етеді.

FорегенРНҚ үлгісінен qPCR-ге кері транскрипцияны алады

lncRNA анықтауыңызды жан-жақты алып жүріңіз

Жануарлардың жалпы РНҚ IерітіндіЖинақ (гДНҚ жою бағанымен)

Жасушаның жалпы РНҚ IерітіндіЖинақ (гДНҚ жою бағанымен)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase бар)(lncRNA-дан бірінші тізбекті cDNA синтезіне арналған супер премикс)

Нақты уақыттағы PCR EasyTM-SYBR Green I

Aартықшылықтар ofРНҚ экстракциясы:

Жинақ үшінші буындағы РНҚ экстракция технологиясын пайдаланады, DNase пайдаланудың қажеті жоқ.

96, 24, 12 және 6 шұңқырлы өсірілген жасушалардан 11 минут, гДНҚ-сыз, жоғары таза, жоғары сапалы жалпы жасуша РНҚ жоғары тиімді экстракция.

lncRNA кері транскрипциясының артықшылықтары:

Геномдық ДНҚ ластануын жылдам жою үшін LncRNA үшін арнайы әзірленген кері транскрипция жүйесі.

Кері транскрипция жүйесі жоғары термиялық тұрақтылыққа ие және әлі де 50 ° C температурада кері транскрипцияның жақсы өнімділігіне ие.

Жоғары GC мазмұны және күрделі қайталама құрылымы бар үлгілерді жоғары тиімділікпен өзгертуге болады.

Артықшылықтарыof qПТР:

Ыстық іске қосу Foregene Taq Polymerase жоғары күшейту тиімділігіне, жоғары күшейту сезімталдығына және жоғары күшейту ерекшелігіне ие.

Оңтайландырылған Real PCR Easy Mix SYBR Green I-ді анықтау сезімталдығын жоғарылатады және оның флуоресценция қарқындылығы флуоресценттік сандық эксперименттердің әртүрлі түрлерінің қажеттіліктерін қанағаттандыра алатын ұқсас өнімдерден 3-5 есе жоғары.