• facebook
  • linkedin
  • youtube

Hot-start Taq ферменті кеңінен қолданылады.Кәдімгі ДНҚ-полимеразамен салыстырғанда, ыстық басталатын Taq ферменті кейбір спецификалық емес күшейтуді және праймер димерлерінің түзілуін тиімді болдырмайды және мақсатты генді күшейтудің сәтті жылдамдығын тиімді жақсарта алады.Әсіресе генетикалық тестілеу саласында өнеркәсіпте міндетті стандарт ретінде ыстық старттық Taq ферменті анықталды және қарапайым ДНҚ полимеразаны қолдануға болмайды.Жоғарыда айтылғандардан көрініп тұрғандай, ыстық басталатын Taq ферменттері кеңінен қолданылады.Қазіргі уақытта ішкі нарықта ыстық басталатын Taq ферменттерінің көптеген брендтері бар, бірақ жоғары сапалы ыстық басталатын Taq ферменттері көп емес.Көптеген ыстық басталатын Taq ферменттік өнімдерімен бетпе-бет келгенде, біз қалай таңдауымыз керек?

1. Күшейтудің тиімділігі жоғары ыстық іске қосу Taq ферментін таңдаңыз

ПТР күшейту тиімділігі Taq ферментінің өнімділігімен тығыз байланысты.Жақсы Taq ферментінің реакция жүйесі оңтайландырылғаннан кейін күшейту тиімділігі 95% жоғары болады және бастапқы үлгі мөлшерінің күшейту диапазоны кең.Мақсатты геннің мазмұны төмен болған кезде қанағаттанарлық күшейтуді алуға болады, ал шаблон мөлшері жоғары болған кезде улану оңай емес және экспоненциалды күшейту кезеңі ұзақ.Нашар өнімділігі бар Taq ферменті үшін реакция жүйесі бірнеше рет оңтайландырылған болса да, күшейту тиімділігі әлі де 90% -дан аз, күшейту қисығының «S» пішіні айқын емес, еңіс шағын және қисық тегіс.Үлгі мөлшері аз болғанда, оны күшейту мүмкін емес, ал шаблон мөлшері жоғары болғанда, күшейту әсері идеалды емес.Сондықтан күшейту тиімділігі жоғары ДНҚ-полимеразаларды таңдау ПТР және qPCR табыстылығы үшін өте маңызды.

2. Күшті фермент қуаты бар ыстық іске қосу Taq ферментін таңдаңыз

70f48394

 

Taq ферментінің ферментативті күші күшейту тиімділігіне байланысты.Жалпы, ыстық басталатын Taq ферментінің ферментативті күші неғұрлым күшті болса, ПТР күшейтудің экспоненциалды өсу кезеңі соғұрлым ұзағырақ, «S-тәрізді» қисық тән, флуоресценция сигналының мәні соғұрлым жоғары болады және мультиплексті ПТР анықтау үшін қолайлы болады.Әлсіз ферментативті күші бар бренд ДНҚ полимеразалары әдетте тек 2-плексті реакцияларды ғана қолдай алады.3-плексті реакцияларды орындау кезінде күшейту қисығы төмен, флуоресценция сигналының мәні төмен және әдеттегі күшейту қисығы жоқ, сондықтан нәтижелерді бағалау қиын.

 

3. Сезімталдығы жоғары, ыстық басталатын Taq ферментін таңдаңыз

 

Жалпы айтқанда, ДНҚ-полимераза жоғары күшейту тиімділігі мен жоғары сезімталдыққа ие, бірақ сәйкессіздіктер де бар.Егер күшейтілетін үлгінің мақсатты генінің молдығы төмен болса, Taq ферментінің күшейту сезімталдығын тексеру ұсынылады.Ең көп тараған анықтау әдісі – мақсатты геннің плазмида фрагментін 10 есе немесе 5 есе градиентті сұйылту, төменгі сұйылтуда ПТР анықтауын жүргізу және анықтау сезімталдығы жоғарырақ ыстық басталатын Taq ферментін таңдау.

 

Жоғарыда айтылғандардан зерттеушілер өздерінің эксперименттік талаптары мен қаржыландыру шарттарына сәйкес таңдау қажет екенін көруге болады.Ыстық іске қосу Taq ферментінің күшейту тиімділігі мен сезімталдығын анықтау үшін градиентті сұйылтуды күшейту тәжірибесін жасаған дұрыс.

 

Foregene мысалы'Так ДНҚ полимераза:

 

Алдын ала HS Taq ДНҚ полимеразасы

 

Сипаттама

 

Foreasy HS Taq ДНҚ полимеразасы генді рекомбинациялау технологиясы арқылы ішек таяқшасының инженерлік бактерияларында көрсетілген ДНҚ полимераза болып табылады.Фермент бірегей реакция буферімен біріктірілген, бұл өнімді жоғары төзімді және үйлесімді етеді және анықтау реакциялары үшін үлгі ретінде үлгі лизатын (Foregene Lysis жүйесі) тікелей пайдалана алады.

15a5e233 2237a171

 

Қолдану

 

Тазартылған үлгілерді және тазартылмаған үлгілерді сапалы ПТР және сандық ПТР анықтау.

 

Сапа бақылауы

 

1. Экзогендік нуклеаза белсенділігі анықталмады

 

2. Хостсыз қалдық геномдық ДНҚ анықтау үшін ПТР әдісі

 

3. Ол адам геномындағы бір көшірме гендерді тиімді түрде күшейте алады

 

4. Бір апта бойы бөлме температурасында сақтаңыз, белсенділік өзгермейді

 

Өнім туралы мәліметтер: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/


Жіберу уақыты: 07 шілде 2022 ж