SOP жүйесін құру

Эксперимент персоналының мінез-құлқын стандарттау үшін ПТР экспериментінің SOP құру.

Экспериментаторлар операциялық процедураларды қатаң сақтайды және адам факторларынан туындауы мүмкін ПТР ластануын барынша азайтады немесе операция кезінде ластанудың пайда болуын болдырмайды.Сонымен қатар, экспериментатордың тиісті кәсіби білімі мен дағдылары болуы керек, соның ішінде тиісті жабдықты пайдалану, бүкіл жұмыс процесін нақтылау, ластанудан тазарту әдістерін және зертханалық сапаны бақылау әдістерін меңгеру, сынақ нәтижелерін дұрыс түсіндіре білу.

Стандартты ПТР зертханасын салу

ПТР зертханасы негізінен төрт аймаққа бөлінген, атап айтқанда реагент дайындау аймағы, үлгіні өңдеу аймағы, күшейту аймағы және күшейту өнімін талдау аймағы.Алғашқы екі аймақ - күшейтуге дейінгі аймақтар, ал соңғы екі аймақ - күшейтуден кейінгі аймақтар.Күшейтуге дейінгі аймақ пен күшейтуден кейінгі аймақты қатаң түрде бөлу керек.Эксперименттік материалдар, реактивтер, жазу қағазы, қаламсаптар, тазалау материалдары және т.б. тек күшейтуге дейінгі аймақтан күшейтуден кейінгі аймаққа, яғни реагент дайындау аймағынан, үлгіні өңдеу аймағынан, күшейту аймағынан және күшейту өнімін талдау аймағынан ағуы мүмкін және кері бағытта ағып кетпеуі керек.Зертханадағы ауа ағыны да кері бағытта емес, күшейтуге дейінгі аймақтан күшейтуден кейінгі аймаққа ағуы керек.

Эксперименттік қадамдарды азайтыңыз

Егер зертхана тек ПТР анықтау және сәйкестендіруді орындаса, әдеттегі ПТР орнына флуоресцентті сандық ПТР қолдану ұсынылады.

Флуоресцентті сандық ПТР анықтау нәтижелерін флуоресцентті сигналдар арқылы жинауға және талдауға болады, сондықтан реакциядан кейін электрофорез үшін қақпақты ашудың қажеті жоқ, бұл аэрозоль түзу үшін реакция өнімдерінің ағуынан туындаған ПТР өнімдерінің ластануын болдырмайды.Гель электрофорезінің жүктеу сатысында қақпақ саңылауларының санын көбейтсеңіз, аэрозольмен ластану пайда болуы мүмкін.Сандық ПТР қолдануды ілгерілету және сапалы ПТР-ны біртіндеп ауыстыру ұсынылады.

UNG ластануға қарсы жүйесін қабылдаңыз

ПТР реакциясы үшін UNG анти-ПТР өнімді ластану жүйесі қолданылады.

Жүйе dTTP орнына dUTP пайдаланады.ПТР реакциясынан кейін барлық ПТР өнімдері (ДНҚ фрагменттері) dUTP-мен біріктіріледі;ПТР реакциясының келесі раундында жүйеге қосылған UNG ферменті спецификалық болуы мүмкін, құрамында dUTP бар барлық ДНҚ фрагменттерін деградациялау үшін ПТР алдында 5 минут бойы 37°C температурада инкубацияланады, содан кейін ПТР реакциясын орындаңыз.Бұл ПТР өнімдерінен туындаған аэрозольді ластануды толығымен жоя алады.Әсер төмендегі суретте көрсетілген:

Ескертпе: Тікелей ПТР сериялары үшін FJ Biotech компаниясының ПТР өнімдерінің ластануына қарсы жүйесінің сериялық өнімдерін таңдауға болады.

Ұсыну

Кең ауқымды генотиптік сынауды жүргізетін зертханалар үшін ақылға қонымды зертханалардың құрылысына қосымша реагенттерді сынау үшін UNG анти-ПТР өнімінің ластану жүйесін пайдалану қатаң ұсынылады.

Ескерту: Бұл жүйені пайдалану бұрыннан туындаған ПТР өнімінің ластануын жоя алмайды.Сондықтан тиісті сынақтың басында UNG жүйесін пайдалану керек, ал UNG жүйесін ПТР өнімдерінің ластануын болдырмау үшін әрқашан ПТР күшейту үшін пайдалану керек.Жалған позитив.

Forge Biotech компаниясының Direct PCR-UNG жүйесін кең ауқымды тестілеу кезінде пайдалану ұсынылады, мысалы: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Өсімдік тұқымының тікелей ПТР жинағы-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Foregene жинақтарының бұл сериясы ПТР анықтауды жылдам және кең ауқымда орындап қана қоймай, сонымен қатар ПТР өнімінің ластануын тиімді болдырмайды және басқара алады.