W: Бауырым, кері транскрипция аяқталды, ақырында соңғы қадам – флуоресцентті сандық ПТР!Әй, аға, нақты уақыттағы сандық ПТР дегеніміз не?
M: ПТР сіз әрқашан білесіз, солай ма?
W: Білесіз бе, ПТР - бұл полимеразды тізбекті реакция және бұл ДНҚ-ны арттыратын технология!
M: Бұл дерлік… Бұл нақты праймерлер арқылы мақсатты ретті миллионнан астам рет күшейтуге арналған техникалық әдіс, бірақ бұл тек мақсатты тізбектің бар немесе жоқтығын көрсетеді және бастапқы үлгінің көлемін анықтай алмайды.Флуоресценциялық сандық ПТР – бұл мәселені шешу үшін әзірленген техникалық әдіс.Нақты уақыттағы ПТР және сандық ПТР (qPCR) әдетте оған сілтеме жасайды.
W: Қарапайым ПТР-дан айырмашылығы флуоресцентті сандық анықтауда жатыр ма?
M: Иә, яғни әрбір ПТР циклінің ұзарту сатысында флуоресценция сигналының қарқындылығы анықталады және сигнал қарқындылығының өзгеруіне сәйкес шаблонның бастапқы мөлшерін есептеуге болады.
В: Бұл өте қиын сияқты!Мен мұны өзім есептеуім керек пе?
М: Бұл сізге баяу үйренуді талап етеді, ең жақсысы принципті түсіне білу.Енді сіз алдымен CT мәніне назар аудара аласыз, ол салыстырмалы түрде интуитивті эксперименттік деректер болып табылады және оның өлшемі үлгінің бастапқы сомасының өлшеміне сәйкес келеді.Сондай-ақ күшейту қисығы және балқу қисығы сияқты графиктер бар.Олар сіздің экспериментіңіз сәтті болды ма, жоқ па деген соңғы сөзді айтады.
У: О, аға.Содан кейін мен qPCR экспериментін жасаймын!
M: Реагент аймағына шаблондарды қоспауға ерекше назар аударыңыз, әйтпесе пайдаланылмаған қоспаңыз оңай ластанады!
W: Түсіндім!

Нақты уақыттағы ПТР Easyᵀᴹ-SYBR Green I жинағы

Жоғары тиімділік, үлкен ерекшелік
Жоғары сезімталдық, жақсы үйлесімділік