• facebook
  • linkedin
  • youtube

Төменгі жағынды/FTA картасы ДНҚ экстракция жинағы

Келесі ықтимал проблемаларды талдауБуккалтампон/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Тазалау бағанасы бітеліп қалған

 

 

Бұл жинақта геномдық ДНҚ экстракциясы операциясында тазарту бағанасы центрифугалау қадамынсыз үлгінің ферментативті лизисі қоспасына тікелей адсорбцияланады және тазарту бағанасы толық ферменттелмегендіктен және үлгінің жоғары тұтқырлығына байланысты бітеліп қалуы мүмкін.

Келесі ықтимал себептер келесідей:

1. Ұлпа үлгілерінің толық емес ферментативті қорытылуы.

Ұсыныс: Foregene Protease үлгісін өңдеу уақыты тиісінше ұзартылуы мүмкін немесе үстіңгі затты 12 000 айн/мин (~ 13 400) центрифугалаудан кейін алуға болады.× ж) 5 мин.

2. Тін үлгілерін немесе үлкен тіндерді шамадан тыс пайдалану.

Ұсыныс: 1-ден аспаған дұрысБуккал үлгідегі жағынды;егер үлгі тым үлкен болса, ST1 Buffer, Foregene Protease, ST2 буферінің дозасын тиісінше арттырыңыз.

3. Үлгі тұтқырлығы тым жоғары.

Ұсыныс: геномдық ДНҚ экстракциясы алдында үлгілерді 10 мМ Tris-HCl-мен тиісті түрде сұйылтуға болады.

4. Қан картасының фрагменттері сорылған.

Ұсыныс: геномдық экстракцияның (FTA Card) 6-қадамының өтпелі центрифугалау уақыты сәйкесінше ұзартылуы мүмкін.

 

Төмен өнімділік немесе ДНҚ жоқ

 

Көбінесе геномдық ДНҚ шығымына әсер ететін әртүрлі факторлар, соның ішінде үлгінің шығу тегі, үлгіні сақтау шарттары, үлгіні дайындау, манипуляция және т.б.

Экстракция кезінде геномдық ДНҚ алынбайды

Ықтимал себептер келесідей:

1. Үлгілерді дұрыс сақтамау немесе тым ұзақ сақтау геномдық ДНҚ деградациясына әкеледі.

Ұсыныс: Ауызша жағындыларды жаңадан сынаған дұрыс және геномдық ДНҚ экстракциялау операциялары үшін сақталған жағындыларды пайдалану ұсынылмайды;қан дақтарының үлгілері сапасының сәйкестігін және сақтау уақыты тым ұзақ болмауын қамтамасыз етуі керек.

2. Тіндерді тым аз қолдану сәйкес геномдық ДНҚ экстракциясына әкелмейді.

Ұсыныс: орындаңызбукаl операция нұсқаулығындағы жағынды сынамаларын алу нұсқауларын және геномдық ДНҚ экстракциясы үшін ауызша жағындыға жеткілікті жасушаларды бекіту үшін мүмкіндігінше көп рет сүртіңіз;қан дақ үлгісін алу үшін қан дақтарын кесу аймағын сәйкесінше үлкейтуге болады.

3. Foregene Protease дұрыс сақталмаған, нәтижесінде оның белсенділігі төмендейді немесе инактивацияланады.

Ұсыныс: сақтау шарттарын растаңызForegene Protease немесе оны ферментативті реакция үшін жаңа Foregene Protease-мен ауыстырыңыз.

4. Жинақтың дұрыс сақталмауы немесе сақтау уақыты тым ұзақ, нәтижесінде жинақтағы кейбір компоненттер істен шығады.

Ұсыныс: жаңасын сатып алыңызБуккал жағынды ДНҚоқшаулау байланысты процедураларға арналған жинақ.

5. WB буфері абсолютті этанолды қоспайды.

Ұсыныс: WB буферінің абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосатынын растаңыз.

6. Элюент силикон пленкасына дұрыс қосылмаған.

Ұсыныс: 65-ті қосыңыз°Cалдын ала қыздырылған элюент силикон мембранасының ортасына түседі және элюция тиімділігін арттыру үшін бөлме температурасында 5 мин қалдырады.

Lөнімді геномдық ДНҚ оқшауланған

Келесі ықтимал себептер келесідей:

1. Үлгілерді дұрыс сақтамау немесе тым ұзақ сақтау геномдық ДНҚ деградациясына әкеледі.

Ұсыныс: Ауызша жағындылар жаңадан алынған жақсырақ, ал консервіленген жағындыларды геномдық ДНҚ экстракциясы үшін пайдаланбау керек.

2. Егер тін үлгісінің мөлшері тым аз болса, алынған геномдық ДНҚ мазмұны аз болады.

Ұсыныс: геномдық ДНҚ экстракциясы үшін ауызша жағындыға жеткілікті жасушалар қосылуы үшін, пайдалану нұсқаулығындағы ауызша жағынды сынамаларын алу нұсқауларын орындаңыз, мүмкіндігінше көп рет сүртіңіз.

3. Foregene Protease дұрыс сақталмаған, нәтижесінде оның белсенділігі төмендейді немесе инактивацияланады.

Ұсыныс: сақтау шарттарын растаңызthe Fореген протеазасы немесе оны жаңасымен ауыстырыңыз Ферменттік реакцияға арналған Форген протеазасы.

4. Элюенттерге есептер.

Ұсыныс: Элюция үшін EB Buffer пайдаланыңыз;ddH пайдалансаңыз2O немесе басқа элюенттер, элюаттың рН 7,0-8,5 арасында екенін растаңыз.

5. Элюат тамшылатып дұрыс қосылмаған.

Ұсыныс: силикон мембранасының ортасына элюент тамшыларын қосып, элюция тиімділігін арттыру үшін бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз.

6. Элюция сұйықтығы тым аз жиналады.

Ұсыныс: геномдық ДНҚ элюциясы үшін, кем дегенде нұсқаулықта талап етілетіндей элюентті пайдаланыңызкем емес 15-тен жоғарыμl.

Lқандай тазалық of геномдық ДНҚоқшауланған

Төмен геномдық ДНҚ тазалығы төмен тәжірибелердің сәтсіздігіне немесе қанағаттанарлықсыз нәтижелеріне әкелуі мүмкін, мысалы: ферменттерді кесіп тастау мүмкін емес, ПТР қызығушылық танытқан ген фрагментін ала алмайды және т.б.

Ықтимал себептер келесідей:

1. Гетеропротеинді ластану, РНҚ ластануы.

Талдау: тазарту бағанасы Buffer PW көмегімен жуылмаған;Buffer PW жуу тазалау бағанасы дұрыс центрифугалық жылдамдықпен жуылмаған.

Ұсыныс: этанолды қоспас бұрын үстіңгі қабатта тұнбаның жоқтығына көз жеткізіңіз;тазалау бағанасын нұсқауларға сәйкес жууды ұмытпаңыз және бұл қадамды өткізіп жіберуге болмайды.

2. Қоспалардың иондарымен ластануы.

Талдау: буферді WB жууды тазарту бағаны бір рет қана жуылды немесе қалдық иондық ластануға әкелді.

Ұсыныс: Қалдық иондарды мүмкіндігінше кетіру үшін WB буферін 2 рет жууды ұмытпаңыз.

3. РНҚ ферментінің ластануы.

Талдау: бөгде РНҚ буферге қосылды;Буферді PW жуу әрекеті дұрыс болмады, нәтижесінде RNase қалдықтары пайда болды, бұл in vitro транскрипциясы сияқты төменгі ағындағы РНҚ тәжірибелік операцияларына әсер етті.

Ұсыныс: Foregene сериясы нуклеин қышқылыизоляиондық жинақтар РНҚ-ны қосымша RNase қоспай-ақ жоя алады,осылайша жаққа жағынды/FTA картасының ДНҚ оқшаулау жинағықажет't RNase қосу;Buffer PW жуу тазалау бағанына арналған нұсқауларды орындаңыз және бұл қадамды өткізіп жіберуге болмайды.

4. Этанол қалдығы.

Талдау: WB буфері тазарту бағанасын жуғаннан кейін бос түтікті центрифугалауды орындамады.

Ұсыныс: Нұсқауларға сәйкес бос түтікті дұрыс центрифугалау операциясын орындаңыз.

5. Басқа қоспалармен ластанулар.

Талдау: Сақталған үлгілер немесе арнайы үлгілер алдын ала өңделмейді.

Ұсыныс: Нұсқауларға сәйкес үлгіні алдын ала мұқият өңдеңіз.

 


Хабарлама уақыты: 18 наурыз 2022 ж