Жиі қойылатын сұрақтарЖануарлардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы

Сізде кездесетін мәселелердің келесі талдауыжануар ұлпасының/жасуша РНҚ экстракциясы will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

РНҚ алынбайды немесе РНҚ шығымы төмен

Көбінесе қалпына келтіру тиімділігіне әсер ететін әртүрлі факторлар бар, мысалы: тін үлгісінің РНҚ мазмұны, жұмыс әдісі, элюция көлемі және т.б.

1. Жұмыс кезінде мұз ваннасы немесе криогенді (4 °C) центрифугалау орындалды.

Ұсыныс: бүкіл процесс бойы бөлме температурасында (15-25 ° C) жұмыс істеңіз, мұзды ваннаға түсірмеңіз және төмен температурада центрифугалауға болмайды.

2. Үлгіні дұрыс сақтамау немесе үлгіні сақтау уақыты шамадан тыс.

Ұсыныс: Үлгілерді -80 °C температурада сақтаңыз немесе сұйық азотта мұздатыңыз және мұздату-ерітуді қайталап қолданбаңыз;РНҚ экстракциясы үшін жаңа тіндерді немесе өсірілген жасушаларды қолдануға тырысыңыз.

3. Үлгі лизисі жеткіліксіз.

Ұсыныс: Тіндерді гомогенизациялау кезінде тіннің жеткілікті түрде гомогенизацияланғанын және тін жасушаларының РНҚ бөлінуін түсіндіру үшін жеткілікті түрде бөлінгенін қамтамасыз етіңіз.

4. Элюент дұрыс қосылмаған.

Ұсыныс: RNase-Free ddH екенін растаңыз₂Тазарту колоннасының мембранасының ортасына О тамшылатып қосылады.

5. RL2 буферіне немесе RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемі қосылмаған.

Ұсыныс: Нұсқауларды орындаңыз, RL2 буферіне және RW2 буферіне абсолютті этанолдың дұрыс көлемін қосыңыз және жинақты қолданар алдында жақсылап араластырыңыз.

6. Тін үлгісінің дозасы сәйкес емес.

Ұсыныс: 10-20 мг ұлпаны немесе (1-5) × 10 пайдаланыңыз⁶RL1 буферіне 500 мкл жасушалар, өйткені тіндерді шамадан тыс пайдалану РНҚ экстракциясының төмендеуіне әкелуі мүмкін.

7. Дұрыс емес элюция көлемі немесе толық емес элюция.

Ұсыныс: тазарту колоннасының элюция көлемі 50-200 мкл;егер элюция әсері қанағаттанарлық болмаса, алдын ала қыздырылған RNase-Free ddH қосқаннан кейін бөлме температурасын орналастыру уақытын ұзарту ұсынылады.₂O, мысалы, 5-10 мин.

8. RW2 буферін жуудан кейін тазарту бағанасында этанол қалдығы бар.

Ұсыныс: RW2 буферін жуудан кейін этанол қалдығы болса, бос түтікті 1 мин центрифугалау, бос түтік центрифугалау операциясының уақытын 2 минутқа дейін арттыруға болады немесе қалдық этанолды жеткілікті түрде жою үшін тазарту бағанасын бөлме температурасында 5 минутқа қоюға болады.

Тазартылған РНҚ бұзылады

Тазартылған РНҚ сапасы үлгінің сақталуы, RNase ластануы және манипуляция және т.б. сияқты факторларға байланысты.

1. Ұлпа үлгілері уақытында сақталмайды.

Ұсыныс: Егер тін үлгілері немесе жасушалар жиналғаннан кейін дер кезінде пайдаланылмаса, дереу -80 °C температурада немесе сұйық азотта криоконсервациялаңыз.РНҚ алу үшін мүмкіндігінше жаңадан алынған тін немесе жасуша үлгісін пайдаланыңыз.

2. Ұлпа үлгілерін қайталап мұздату-еріту.

Ұсыныс: Тін үлгілерін сақтау кезінде сақтау үшін оларды кішкене бөліктерге кесіп, үлгінің қайта-қайта мұздату-ерітуін және РНҚ деградациясын болдырмау үшін оларды пайдалану кезінде бөліктердің бірін алып тастаған дұрыс.

3. Операция кезінде RNase енгізіледі немесе бір рет қолданылатын қолғап, маска және т.б. кимейді.

Ұсыныс: РНҚ экстракциялау эксперименттерін РНҚ манипуляциясының бөлек бөлмелерінде орындаған дұрыс және тәжірибе алдында кесте тазартылады.

Тәжірибе кезінде RNAse енгізуден туындаған РНҚ деградациясын азайту үшін бір рет қолданылатын қолғаптар мен маскалар киіңіз.

4. Қолдану кезінде реагенттер RNase-мен ластанған.

Ұсыныс: Қатысты эксперименттер үшін жаңа Animal Total RNA оқшаулау жинағымен ауыстырыңыз.

5. РНҚ манипуляциясында қолданылатын центрифуга түтіктері, ұштары және т.б. RNase-мен ластанған.

Ұсыныс: РНҚ экстракциясында қолданылатын центрифуга түтіктерінің, ұштарының, тамшуырларының және т.б. барлығында RNase жоқ екенін растаңыз.

Тазартылған алынған РНҚ төменгі ағындағы эксперименттерге әсер етеді

Тазарту бағанымен тазартылған РНҚ, егер тұз иондары, ақуыз мөлшері тым үлкен болса, төменгі ағындық тәжірибеге әсер етеді, мысалы: кері транскрипция, Northern Blot et al.

1. Элюцияланған РНҚ-да тұз ионының қалдықтары болады.

Ұсыныс: RW2 буферіне этанолдың дұрыс көлемі қосылғанын растаңыз және жұмыс үшін көрсетілген центрифугалық жылдамдықпен 2 тазарту бағанасын жууды орындаңыз;егер тұз ионының қалдығы болса, тазарту бағанасын RW2 буферіне бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз және тұздың ластануын барынша жою үшін центрифугалауды орындаңыз.

2. Элюцияланған РНҚ-дағы этанол қалдығы.

Ұсыныс: RW2 буферін жуғаннан кейін бос түтікті центрифугалау операциясын жұмыс үшін көрсетілген центрифугалау жылдамдығымен орындаңыз, егер әлі де этанол қалдығы бар болса, бос түтік центрифугалау операциясының уақытын 2 минутқа дейін арттырыңыз немесе центрифугалаудың бос түтігін қайта ұлғайту үшін оны бөлме температурасында 5 минутқа қалдырыңыз.

Нульцеин қышқылы үлгілерінің түрлерін оқшаулау

Foregene компаниясының РНҚ оқшаулау жинақтары келесі үлгі сорпаларынан жалпы РНҚ изоляциясын/экстракциясын ала алады: Жануарлар ұлпасы, өсімдік, жасушалар, вирустық, қан және т.б.

Жинақты қалай сақтауға болады

Бөлме температурасында 24 ай бойы сақтау.