• facebook
  • linkedin
  • youtube

Авторлары: Ван Сяоян, Чжао Эрю

Бөлім: Цзяочжоу ауруханасы, Тунджи университетіне қарасты Дунгфан ауруханасы

Қазіргі уақытта респираторлық патогенді нуклеин қышқылын анықтауға арналған негізгі үлгі түрі тамақ тампоны болып табылады.Көбінесе қолданылатын үлгілерді сақтау ерітінділерінің көптеген түрлері бар, олардың барлығын тасымалдау және сақтау үшін тоңазытқышта немесе мұздату қажет;Жинау және тасымалдау процесінде төмен температураның бүкіл процесін бақылау қиын, ал үлгі сынау алдында сапаны бақылау қиын.[1-2].

RNase (RNase) - бұл РНҚ-ны гидролиздейтін, негізінен нуклеотидтер арасындағы фосфодиэфирлік байланыстарды үзетін эндонуклеаза.RNase молекуласы өте тұрақты, құрылымында дисульфидті байланыстар бар және оның белсенділігі екі валентті катиондардың болуын қажет етпейді, сондықтан RNase оңай денатурацияланбайды, тіпті жоғары температурада немесе денатуранттарды қолданғаннан кейін де ренатурациялануы оңай.РНазалар эндогендік және экзогендік болып бөлінеді.Эндогендік RNase жасушалар жарылған кезде бір мезгілде шығарылуы мүмкін.Сондықтан эндогендік РНазалардың рөлін жою РНҚ экстракция процесіндегі өте маңызды қадам болып табылады.Экзогендік РНазалар кең таралған.РНҚ ауада, адам терісінде, шашта және сілекейде болады, олар РНҚ жеңіл деградациясының маңызды себептері болып табылады.[3].

Деректер сұрауы

CANS-CL02-A009 «Молекулярлық диагностика саласында медициналық зертхананың сапа және құзыретті аккредиттеу жөніндегі нұсқаулықтарды қолдану» техникалық талаптарда су сапасының тиісті стандарттары өтінімге сәйкес тұжырымдалуды ұсынады;Бір рет қолданылатын ауа өткізбейтін контейнерлер:

айрге (2)

RNase/Классификация

(1) RNase A

Сиырдың ұйқы безінен алынған рибонуклеаза A (RNase A) - эндорибонуклеаза, ол РНҚ-дағы пиримидин қалдықтарының 3′ ұшына арнайы шабуыл жасай алады, цитозинді немесе көрші нуклеотидтер түзетін урацилді кеседі.Фосфодиэфирлік байланыс, реакцияның соңғы өнімі 3′ пиримидин нуклеотиді және соңында 3′ пиримидин нуклеотиді бар олигонуклеотид болып табылады.

(2) RNase T1

Рибонуклеаза T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae-ден алынған, ол арнайы гуаниннің 3′-терминалды фосфатына әсер етеді, ал бөліну орны гуаниннің 3′ фосфаты мен көрші нуклеотидтердің 5′ гидроксилінің арасында орналасқан.Реакцияның соңғы өнімі 3′гуанил қышқылы және соңында 3′гуанил қышқылы бар олигонуклеотид фрагменттері.

(3) RNase H

Рибонуклеаза H (RNase H) алғаш рет бұзау тимус ұлпасынан табылды және оның кодтау гені ішек таяқшасына клондалады.Ол ДНҚ-ны арнайы бұза алады: РНҚ гибридті дуплекстеріндегі РНҚ жіптері, нәтижесінде 3′-OH және 5′-монофосфатты ұштары бар олигонуклеотидтер мен мононуклеотидтер пайда болады, ол бір немесе екі тізбекті ДНҚ немесе РНҚ-ны бұза алмайды.

RNase

Функция және пайдалану

Рибонуклеаза рибонуклеин қышқылының (РНҚ) ыдырауын катализдейді және жасанды түрде синтезделеді.Дәрілік жақпа жарақат пен буын ауруын емдеу үшін жергілікті қолданылады.Есептерге сәйкес, рибонуклеаза хост жасушасының метаболизмін өзгерте алады, вирус синтезін тежей алады, in vitro тұмау вирусының көбеюін тежей алады және тауық эмбриондарында вакцина мен герпес вирусының түзілуін тежей алады.Клиникалық қолдану рибонуклеазаны күнделікті 180 мг бұлшықет ішіне енгізу, эпидемиялық энцефалит емдеуге пайдалы, рибонуклеаза рибонуклеин қышқылының (РНҚ) ыдырауын катализдейді және қазір жасанды түрде синтезделеді.Дәрілік жақпа жарақат пен буын ауруын емдеу үшін жергілікті қолданылады.Есептерге сәйкес, рибонуклеаза хост жасушасының метаболизмін өзгерте алады, вирус синтезін тежей алады, in vitro тұмау вирусының көбеюін тежей алады және тауық эмбриондарында вакцина мен герпес вирусының түзілуін тежей алады.Рибонуклеазаны күнделікті 180 мг бұлшықет ішіне енгізу эпидемиялық энцефалит емдеу үшін тиімді.

RNase

Ингибитор анықтамасы

RNase ингибиторы бірлігінің анықтамасы: 5ng RNase A белсенділігінің 50% тежеу ​​үшін қажетті фермент мөлшері бір бірлік.

Айрге (1)

RNase ингибиторлары қалай жұмыс істейді

Гуанидин-изотиоцианат:

Гуанидин-изотиоцианат - C2H6N4S молекулалық формуласы бар органикалық қосылыс.Негізінен биологиялық медицинада, химиялық реагенттерде және т.б. қолданылады. Гуанидин-изотиоцианат ақуызды лизистік агент болып табылады және ол жиі молекулалық диагностикалық реагенттерде лизис ерітіндісінің негізгі компоненті ретінде қолданылады.Ол тіндердің лизисін, жасуша құрылымын бұзады және нуклеин қышқылын нуклеопротеиннен ажырата алады және RNase-ге күшті денатурацияға ие.Бұл қазіргі уақытта ең тиімді RNase ингибиторы.

TRIzol - бұл жалпы РНҚ-ны жасушалардан немесе тіндерден тікелей бөліп алуға болатын жаңа жалпы РНҚ экстракциялық реагент.Оның құрамында жасушаларды жылдам бұзатын және жасушалар шығаратын нуклеазаларды тежейтін фенол және гуанидин-изотиоцианат сияқты заттар бар.

(Алайда гуанидин-изотиоцианат зертханалық зерттеушілердің денсаулығы үшін қауіпті.)

RNasin:

Егеуқұйрықтың бауырынан немесе адамның бластодермасынан алынған қышқыл гликопротеин.Рназин RNase-нің бәсекеге қабілетсіз ингибиторы болып табылады, ол әртүрлі RNase-мен байланысып, оларды инактивациялай алады.

(Толығырақ: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

айрге (3)

Hжоғары температура:

Жоғары температура да белоктың денатурациясының кең таралған құралы болып табылады.

Диэтилпирокарбонат (DEPC):

DEPC күшті, бірақ толық емес RNase ингибиторы болып табылады, ол ақуыздарды денатурациялау үшін RNase белсенді тобының амин қышқылы имидазол сақинасымен біріктіру арқылы RNase белсенділігін тежей алады.

Ванадилрибонуклеозидтер кешені:

Ванадий оксиді иондары мен нуклеозидтерден түзілген, RNase-мен өтпелі заттар түрінде байланысатын, RNase белсенділігін толығымен дерлік тежей алатын кешен.

басқа:

СДС, мочевина, диатомды жер және т.б. да РНазға белгілі бір тежегіш әсер етеді.

Сарапшылардың пікірлері

Ли Южие бас техник

Цзяочжоу ауруханасы, Тунджи университетіне қарасты Дунфан ауруханасы зертханалық департаментінің директоры

Экзогендік RNase биодеградациясының алдын алу үшін РНҚ экстракциясы процесінде маскалар, қолғаптар және бас киімдер кию және жиі ауыстыру керек.Барлық шыны ыдыстарды кептіру пешінде 200°C температурада 2 сағаттан артық пісіру керек.Пісіруге қолданылатын материалдар, мысалы, пластик, DEPC суымен өңделуі керек, содан кейін тазартылған сумен жуылады.РНҚ-ны экстракциялау, сақтау және идентификациялау үшін қолданылатын реагенттер немесе құрылғылар РНҚ-ға арналып, тәуелсіз РНҚ жұмыс аймағын құру керек.

сілтемелер:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, т.б.Жергілікті австралиялық балаларда төменгі тыныс жолдарының жедел инфекциясы басталғанға дейін мұрын-жұтқыншақтағы бактериялар мен вирустар[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Қытай профилактикалық медицина қауымдастығының ауруханалық инфекцияны бақылау бөлімшесі.Клиникалық микробтық үлгілерді жинау және тексеру жөніндегі нұсқаулық [J].Қытай ауруханасының инфекциясы журналы, 2018 (20): 3192-3200.

[3] «Клиникалық сынақ он мың неге молекулярлық биология сынағының көлемі»


Жіберу уақыты: 09 тамыз 2022 ж