Кіріспе:

РНҚ, ғылыми атауы рибонуклеин қышқылы, оның аббревиатурасы RiboNuclein Acid сөзінен шыққан, фосфодиэфирлік байланыстар арқылы кемінде ондаған рибонуклеотидтерді қосу арқылы түзілетін нуклеин қышқылының бір түрі.

РНҚ-ны зерттеудің алғышарты ластанбаған Жалпы РНҚ алу болып табылады және РНҚ экстракциясының негізгі принципін шамамен төмендегідей қорытындылауға болады:

1. Алдымен жасушаларды бұзыңыз

2. Содан кейін макромолекулалық қоспаларды (белоктар, липидтер, ДНҚ және т.б.) алып тастаңыз.

3. Соңында, РНҚ тұздар мен органикалық еріткіштерді алып тастау және РНҚ-ны одан әрі тазарту кезінде тұнбаға түседі.

Экстракция әдісінің өткені мен бүгіні

РНҚ экстракция әдісінің бірінші буыны Пиотр Хомчински есімді атасы мен әжесі Николетта Сакки ойлап тапқан TRIzol тұндыру әдісі (қолданылатын реагенттерге гуанидин-изотиоцианат, фенол, хлороформ және т.б. кіреді), өйткені бұл өнертабыс РНҚ экстракциясын жылдам және оңай алуға мүмкіндік береді, содан бері RNA зерттеуі басталды.

Кейін атам бұл патентті Invitrogen компаниясына сатты, ал Invitrogen бұл әдісті әлемге насихаттап, кеңінен қолданылатын әдіске айналды.

Кейінірек Invitrogen-ді Thermo сатып алды!

Өкілдік өнім: Invitrogen's TRIzol реактиві

Дегенмен, TRIzol преципитация әдісі РНҚ-ның бірнеше рет преципитациясын және экстракциясын талап етеді, ал қолданылатын реагенттер улы және ұзақ жұмыс істейді.

Сондықтан басқа қоспаларды кетіру кезінде үлгідегі РНҚ-ның қалпына келуін барынша арттыру үшін нуклеин қышқылының арнайы адсорбциялық материалы ретінде силикагельді мембрананы қолдану арқылы екінші буынды бағанды-ферменттік тазарту әдісі пайда болды.

Екінші буын әдісі тұрақты өнімділік негізінде операцияны жеңілдетеді, қауіп факторын азайтады, РНҚ экстракциясының тиімділігін арттырады.

Өкілдік өнімдер: QIAGEN RNeasy және отандық өнімдердің көпшілігі

Дегенмен, бірінші және екінші ұрпақ әдістері ДНҚ ластануын жою үшін DNase пайдалануды талап етеді, бұл кейінгі төменгі ағындағы эксперименттерге кейбір қолайсыздықтар әкеледі.Қалдық DNase кері транскрипцияның тиімділігін төмендетеді және бірінші тізбекті кДНҚ синтезін азайтады, осылайша нәтижелердің дәлдігіне әсер етеді.

Сондықтан үшінші буынды экстракция әдісі екінші ұрпақ негізінде оңтайландырылған.Экспериментке ешқандай фермент қосудың қажеті жоқ, ал РНҚ тек екі бағанмен оңай алуға болады.

1-баған: ДНҚ тазарту үшін ДНҚ-тазалау бағанасы

2-баған: тек РНҚ бар баған арнайы адсорбциялайды және РНҚ қалпына келтіреді

Мұндай қарапайым операция уақытты үнемдеп қана қоймайды, сонымен қатар төменгі ағындағы эксперименттердің жұмысын жеңілдетеді!

Өкілдік өнімдер: QIAGEN RNeasy Plus жәнеШетелдікРНҚ тазарту сериясының өнімдері

(RNeasy Plus)

（ФоргендікіӨсімдіктің жалпы РНҚ оқшаулау жинағы）

Тыныш айтамын!Foregene компаниясының РНҚ жинағы сондай-ақ адам ағзасына улы заттарды қоспай-ақ қатты беттегі 400 мкг RNase-ны 1 минут ішінде толығымен жоя алатын өте оңай RNase Өшіргішін ұсынады!

Сурет1: Операциялық процесті салыстыру диаграммасы

Foregene компаниясының өнімдері РНҚ экстракциясын небәрі екі әнде аяқтай алады, басқаларды тәжірибеңіздің барысына қызғанбаңыз!

Сурет2:Eэксперименттік нәтижелер салыстыру диаграммасы

Бірінші буын (1: TRIzol)

Екінші буын (2: QIAGEN RNeasy)

Үшінші буын (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Сурет3: qPCR графигі (күшейту қисығының графигі)

Бірінші ұрпақ (жасыл түс TRIzol -, қызыл түс TRIzol + дегенді білдіреді)

Екінші ұрпақ (аспан көкі QIAGEN RNeasy-, қызыл түс QIAGEN RNeasy + дегенді білдіреді)

Үшінші ұрпақ (көк түс QIAGEN RNeasy plus, жасыл түс Foregene дегенді білдіреді)

(Ескертпе: qPCR графигі «-» DNase қосылмағанын және ДНҚ ластануы жойылмағанын көрсетеді. Сондықтан КТ жоғарырақ және нәтиже дәл емес; «+» DNase қосылғанын және ДНҚ ластануы жойылғанын көрсетеді, нәтиже дәл)

Әрбір техникалық жаңарту эксперимент жұмысының қарапайым және пайдаланушыға ыңғайлы бағытта дамып келе жатқанын білдіреді.

Foregene көбірек ғылыми зерттеушілерге эксперименттік уақыт пен шығынды үнемдеуге, жоғары сапалы эксперименттік нәтижелерге қол жеткізуге және бірлесе отырып аса құнды ғылыми зерттеулердің жетістіктерін жасауға көмектесуді мақсат етеді.